鹅胚母源抗体吸收规律的研究

论文摘要

卵黄抗体即卵黄免疫球蛋白就是卵黄中的γ—卵黄球蛋白,由于其蛋白质的物理化学性质、免疫学性质等方面与哺乳动物IgG存在一定差异,所以在免疫学领域把由禽卵黄中获得的抗体称为卵黄免疫球蛋白（Immunoglobulin of Yolk,简称IgY）。卵黄抗体在组成上以IgG为主,也含有少量的IgM和IgA。在禽类,母代可以通过卵子将自身的免疫球蛋白传递给子代,对子代起到保护作用。因此,对母源抗体特别是IgG的研究,对禽类的免疫学研究具有一定的意义。本试验分两部分进行,首先建立能对IgG定量的双抗体夹心ELISA,包括鹅IgG的提取（饱和硫酸铵法和Sephodex-G200法）,鼠抗鹅IgG抗体的制备,兔抗鹅酶标抗体的制备、参考阴性血清的制备（饱和硫酸铵法）、参考阴性卵黄的制备（水稀释法和氯仿法）。ELISA方抗体包被时间,样品反应时间、酶标抗体反应时间等各试验条件的确定,ELISA检测方法敏感性、特异性、重复性的检验。在验证该ELISA方法成熟后,分别用参考阴性血清和参考阴性卵黄做稀释液,在此稀释液中加入不同浓度的鹅IgG,建立鹅IgG标准曲线。然后对吉林白鹅品系鹅进行样品采集。卵黄采样按如下方法进行,孵化前采集6份卵黄样品,从4日龄开始隔日采样,每次采样6份,采集样品用无菌蒸馏水7倍稀释后冻存于-20℃冰箱中。至34日龄卵黄消失采样工作结束。血清的采集按如下方法进行,从14日龄开始,隔日采样,每次采样6份,样品采集后冻存于-20℃冰箱中。采集所有样品后,用建立的双抗体夹心ELISA方法分别对卵黄和血清样品进行检测,检测结果利用标准曲线换算成蛋白含量。研究发现,卵黄中的IgG含量在整个孵化期中,呈现平稳成下降趋势,卵黄的体积也相应减小,即卵黄中抗体总量的变化同时与卵黄中抗体浓度和卵黄体积相关。卵黄中的抗体含量由孵化前的4311.196μg/ml下降至卵黄消失前的2821.363μg/ml。卵黄的体积在20日龄之前变化不是很明显,但22日龄以后,卵黄的体积急剧下降,据此推测大量抗体在该阶段为鹅胚利用。鹅胚血清中IgG在整个孵化期中,总体成上升趋势,在24日龄以前血清中抗体含量相对较低,在26日龄后血清中抗体含量呈急剧上升趋势,在34日龄血清中的抗体含量达到高峰,36日龄后呈下降趋势。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 一 引言
• 1.1 双抗体夹心ELISA原理及卵黄的概述
• 1.2 研究的目的和意义
• 二 正文
• 2.1 试验材料
• 2.2 试验方法
• 三 结果
• 3.1 鹅IgG及其抗体制备结果
• 3.2 鼠IgG制备结果
• 3.3 兔抗鹅酶标抗体的检测结果
• 3.4 双抗体夹心ELISA方法的建立
• 3.5 ELISA检测步骤
• 3.6 ELISA检验方法的检测结果
• 3.7 蛋白标准含量曲线检测结果
• 3.8 卵黄样与血汪采检测结果
• 3.9 卵黄及血清IgG含量的变化规律
• 四 讨论
• 4.1 鹅血清IgG参考阴性的选择
• 4.2 鹅卵黄IgG参考阴性的选择
• 4.3 鹅血清抗体吸收规律及卵黄抗体吸收规律
• 五 结论
• 5.1 ELISA方法的建立
• 5.2 种蛋卵黄及鹅胚IgG的消长收规律
• 参考文献
• 致谢
• 个人简介