禽流感病毒感染雏鸭免疫器官免疫功能变化及IL-2 mRNA的表达

禽流感病毒感染雏鸭免疫器官免疫功能变化及IL-2 mRNA的表达

论文摘要

禽流感(avian influenza,AI)是由正黏病毒科A型流感病毒——禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)引起的主要侵害家禽呼吸系统、生殖系统和消化系统的传染病。该病不但造成各国养禽业巨大经济损失,而且对人类健康构成极大威胁。鸭作为水禽在禽流感流行中具有重要的地位。但是,对鸭感染禽流感病毒后,其免疫器官功能的变化,至今尚未见全面系统的报道。因此,本项研究对雏鸭感染禽流感病毒后,其免疫器官(胸腺、脾脏、法氏囊)T、B淋巴细胞增殖功能及其数量和IL-2 mRNA表达的动态变化进行了全面系统的研究,旨在揭示禽流感病毒感染雏鸭后,对雏鸭免疫器官免疫功能的影响及其机制,为禽流感防制及疫苗研制提供重要的实验依据。研究结果发现:1. AIV感染21日龄雏鸭后,其胸腺、法氏囊IL-2 mRNA表达均于感染后1~21天不同程度地低于相应对照雏鸭;其中在1~14天差异显著或极显著(p<0.05或p<0.01);AIV感染雏鸭脾脏IL-2 mRNA表达在感染后1~14天低于对照雏鸭,并于1~9天差异显著或极显著(p<0.05或p<0.01)。雏鸭感染AIV后,其免疫器官IL-2 mRNA表达在感染初期显著降低,使免疫器官分子免疫调节功能障碍,导致机体细胞免疫和体液免疫功能减弱,表明IL-2在抗流感病毒感染中发挥极其重要的作用;免疫器官IL-2 mRNA表达于感染后期接近对照雏鸭,表明AIV感染对雏鸭IL-2的抑制作用是暂时的。2. AIV感染21日龄雏鸭后,其胸腺T淋巴细胞对ConA的增殖反应,在感染后121天均低于对照雏鸭,其中,感染后39天明显降低(p<0.05或p<0.01);脾脏T淋巴细胞增殖功能于感染后59天显著低于对照雏鸭(p<0.05或p<0.01)。胸腺TANAE+淋巴细胞数量程度不同地低于对照雏鸭,其中,皮质部于感染后3~9天较对照雏鸭明显下降(p<0.05或p<0.01);而髓质部于感染后1~9天明显低于对照雏鸭(p<0.05或p<0.01);法氏囊淋巴滤泡皮质和髓质TANAE+淋巴细胞数量分别于感染后5~9天和3~9天显著低于对照雏鸭(p<0.05或p<0.01);脾脏鞘动脉周围T ANAE+淋巴细胞数量在感染后1~9天不同程度地低于对照雏鸭,其中,1~7天差异显著或极显著(p<0.05或p<0.01);脾脏红髓T ANAE+淋巴细胞数量于感染后1~21天均低于对雏鸭,并于AIV感染后1~9天较对照雏鸭显著下降(p<0.05或p<0.01)。雏鸭感染AIV后,其免疫器官T淋巴细胞数量迅速减少,随病程发展,于后期逐渐恢复。上述结果可能是AIV感染早期导致雏鸭死亡的重要因素之一。3. AIV感染21日龄雏鸭后321天,其法氏囊B淋巴细胞对LPS的增殖反应不同程度地低于对照雏鸭,且314天明显降低(p<0.05或p<0.01);脾脏B淋巴细胞增殖功能在AIV感染后19天明显低于对照雏鸭(p<0.05或p<0.01),表明AIV感染可导致雏鸭体液免疫功能下降。4. AIV感染21日龄雏鸭后,免疫器官IL-2 mRNA表达、T、B淋巴细胞数量及其增殖功能在AIV感染的急性期均呈现降低或减少,表明AIV感染雏鸭免疫器官免疫活性细胞,特别是T、B淋巴细胞活化、增殖受抑制,机体细胞免疫和体液免疫功能减弱或降低,可能是造成AIV感染早期雏鸭死亡的重要原因。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 1 引言
  • 1.1 禽流感及其病毒研究进展
  • 1.1.1 禽流感病毒的生物学特性
  • 1.1.2 禽流感的生态学与流行特征
  • 1.1.3 禽流感的临床症状及病理变化
  • 1.1.4 禽流感的诊断
  • 1.1.5 禽流感的防制
  • 1.2 机体抗感染的免疫机制
  • 1.2.1 非特异性抗感染免疫
  • 1.2.2 特异性抗感染免疫
  • 1.2.3 病毒逃逸抗感染免疫的机制
  • 1.3 IL-2 研究进展
  • 1.3.1 IL-2 概况
  • 1.3.2 IL-2 的产生和调节
  • 1.3.3 IL-2 的功能
  • 1.3.4 IL-2 受体
  • 1.3.5 IL-2 的应用
  • 1.4 实时荧光定量PCR 在细胞因子MRNA 检测中的应用
  • 1.4.1 细胞因子mRNA 检测方法
  • 1.4.2 RT-FQ-PCR 基本原理
  • 1.4.3 RT-FQ-PCR 的定量检测
  • 1.4.4 细胞因子mRNA 检测意义
  • 1.5 本研究的目的及意义
  • 2 材料和方法
  • 2.1 实验材料
  • 2.1.1 病毒
  • 2.1.2 实验动物
  • 2.1.3 主要试剂
  • 2.1.4 主要仪器设备
  • 2.2 实验方法
  • 2.2.1 实验动物分组及其处理
  • 2.2.2 实验材料采取及处理
  • 2.2.3 检测指标及方法
  • 2.3 数据处理
  • 3 结果与分析
  • 3.1 鸭免疫器官IL-2 MRNA 表达REAL TIME RT-PCR 检测方法的建立及应用..
  • 3.1.1 总RNA 质量鉴定
  • 3.1.2 鸭免疫器官IL-2 m RNA 表达Real Time RT-PCR 检测方法的建立
  • 3.2 AIV 感染21 日龄雏鸭免疫器官IL-2 MRNA 的表达
  • 3.3 AIV 感染21 日龄雏鸭免疫器官T 细胞增殖功能变化
  • 3.4 AIV 感染21 日龄雏鸭免疫器官B 细胞增殖功能变化
  • ANAE+细胞数量变化'>3.5 AIV 感染21 日龄雏鸭免疫器官TANAE+细胞数量变化
  • ANAE+细胞数量变化'>3.5.1 AIV 感染21 日龄雏鸭胸腺TANAE+细胞数量变化
  • ANAE+细胞数量变化'>3.5.2 AIV 感染21 日龄雏鸭法氏囊TANAE+细胞数量变化
  • ANAE+细胞数量变化'>3.5.3 AIV 感染21 日龄雏鸭脾脏TANAE+细胞数量变化
  • 3.6 AIV 感染21 日龄雏鸭发病和死亡情况
  • 4 讨论
  • 4.1 H5N1 亚型AIV 感染对雏鸭免疫器官IL-2 MRNA 表达的影响及其机制
  • 4.2 H5N1 亚型AIV 感染对雏鸭免疫器官细胞免疫功能的影响及其机制
  • 4.3 H5N1 亚型AIV 感染对雏鸭免疫器官体液免疫功能的影响及其机制
  • 5 结论
  • 致谢
  • 参考文献
  • 附图
  • 攻读硕士学位期间发表的学术论文
  • 相关论文文献

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