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黑加仑提取物保护血管内皮细胞氧化损伤的实验研究

2020-12-02阅读(92)

黑加仑提取物保护血管内皮细胞氧化损伤的实验研究

论文摘要

目的:本研究采用过氧化氢（H2O2）体外诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vascular endothelial cells,ECV-304）损伤,建立ECV-304氧化损伤模型,观察黑加仑提取物对损伤ECV-304的保护作用,并探讨其机制。方法:1.体外ECV-304氧化损伤的建立:实验分正常对照组,H2O2组（浓度分别为0.40mmol/L,2.00mmol/L,10.00mmo1/L）,用H2O2分别作用于培养24、48、72h后的ECV-304细胞损伤4h后,测定各组细胞四唑盐（MTT）指标,并观察各组细胞形态变化。2.黑加仑提取物对体外ECV-304氧化损伤保护作用的研究:实验分①正常对照组;②阴性对照组（二甲基亚砜）;③H 2O2模型组（H2O2浓度为2.00mmo1/L ）;④受试物低、中、高浓度组在培养基中先加入终浓度为3.13μg/mL、12.50μg/mL和50.00μg/L的黑加仑提取物孵育24小时,再加入2.00mmo1/L的H2O2诱导损伤⑤阳性对照组培养基中先加入终浓度为100.00μmol/L的维生素E孵育24小时,再加入2.00mmo1/L的H2O2诱导损伤;收集细胞,测定各组细胞活力（OD值）、一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）以及乳酸脱氢酶（LDH）、内皮素（ET）和前列环素（PGI2）的稳定代谢物6-Keto-PGFla。3.黑加仑提取物拮抗H2O2诱导的ECV-304凋亡:实验分组和条件同2,诱导凋亡后收集细胞,流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染标记法测定细胞凋亡率。结果:1.体外ECV-304氧化损伤模型的建立:①不同浓度H2O2损伤组与正常对照组细胞形态光镜下差别显著。随着H2O2浓度的提高,损伤越重,形态学改变越明显。②H 2O2模型组与正常对照组细胞活力（OD值）均有差别,且有统计学意义（P<0.05）,随着H2O2浓度的升高,细胞活力（OD值）有降低的趋势。2.黑加仑提取物对体外ECV-304氧化损伤保护作用的研究:受试物3.13μg/mL～50.00μg/mL组大部分细胞仍保持多角形,细胞形态、结构基本清晰,部分细胞裂解为碎片状、漂浮。阴性对照组细胞则无明显改变,阳性对照组细胞呈多角形,排列有所紊乱。模型组NO、PGI2含量均低于正常对照组（P<0.01）,MDA、ET含量及LDH活力均明显高于正常对照组（P<0.01）,除阴性对照组外（P>0.05）,正常对照组,黑加仑提取物中、高剂量组,阳性对照组分别与H2O2模型组比较,细胞活力（OD值）及NO、PGI2含量均显著升高（P<0.05或者P<0.01）,MDA、ET含量及LDH活力显著降低（P<0.05或者P<0.01）。3.黑加仑提取物拮抗H2O2诱导的ECV-304凋亡:黑加仑提取物低、中、高剂量组,阳性对照组和正常对照组早期凋亡率和总凋亡率明显低于H2O2模型组;黑加仑提取物组随着浓度的增高,早期凋亡率和总凋亡率逐渐降低。结论:1、H2O2可诱导ECV-304损伤,且随其浓度不同,使ECV-304受损程度不同。H2O2作用时间4小时及浓度2.00mmol/L时为适合本实验研究的最佳条件。2、黑加仑提取物各剂量都能提高内皮细胞的活力,增加NO、PGI2含量,降低MDA、ET含量及LDH活力,且呈现一定的浓度依赖性。从而可以认为黑加仑提取物对H2O2诱导的ECV-304损伤有明显的保护作用。3、黑加仑提取物及维生素E可降低H2O2诱导的ECV-304凋亡的早期凋亡率和总凋亡率。4、黑加仑提取物及维生素E对H2O2诱导ECV-304损伤保护作用的机制可能是抗氧化及抗凋亡作用。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 前言
  • 材料与方法
  • 1. 试验材料
  • 1.1 细胞株
  • 1.2 试验受试物
  • 1.3 主要试剂
  • 1.4 主要仪器
  • 2. 方法
  • 2.1 ECV-304 细胞培养和传代
  • 2.2 过氧化氢浓度的筛选
  • 2.3 黑加仑提取物对过氧化氢引起的内皮细胞损伤的保护作用
  • 2.4 Annexin-V-FITC/PI 双标记法检测细胞凋亡
  • 3. 质量控制
  • 4. 统计方法
  • 结果
  • 2O2对内皮细胞生长活力的影响及形态学改变'>1.H2O2对内皮细胞生长活力的影响及形态学改变
  • 2O2损伤的内皮细胞的影响'>2.黑加仑提取物对 H2O2损伤的内皮细胞的影响
  • 讨论
  • 2O2 损伤模型的建立'>1.内皮细胞 H2O2损伤模型的建立
  • 2O2 引起的内皮细胞损伤的保护作用'>2.黑加仑提取物对 H2O2引起的内皮细胞损伤的保护作用
  • 2O2 诱导的 ECV-304 凋亡的影响'>3.黑加仑提取物对 H2O2 诱导的 ECV-304 凋亡的影响
  • 小结
  • 致谢
  • 参考文献
  • 综述 植物化学物保健功能的研究进展
  • 攻读硕士学位期间发表的学术论文
  • 导师评阅表

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