论文摘要
目的：吸入麻醉药在临床麻醉中有着广泛的应用。其中,七氟醚以其理化特点成为儿童麻醉中主要麻醉药物。随着其使用的增加,七氟醚的潜在神经毒性引起了麻醉工作者的关注。研究显示,七氟醚可以导致实验动物的学习记忆功能受损。中枢神经系统在发育期形成大量的突触结构,此时易受药物、刺激等外界因素影响。树突棘被认为是记忆的结构基础,是突触发育成熟的标志。PSD-95蛋白是兴奋性突触后膜的骨架蛋白,能协调突触的发生发育,对于突触的发生、稳定和可塑性调节,起着重要作用。NMDA受体与突触的可塑性及学习记忆密切相关。本研究旨在从树突棘及其功能蛋白PSD-95、NMDA受体方向,观察七氟醚对发育中大鼠学习记忆的长期损害及可能机制。材料和方法：7天龄大鼠2.5%七氟醚麻醉4小时建立海马功能损伤模型。大鼠56天龄时Morris水迷宫检测其空间学习记忆能力。尼氏染色观察大鼠海马各区神经元密度。荧光黄细胞内注射、激光共聚焦扫描成像观察海马各区神经元树突棘数量。Western Blot检测麻醉后即刻及56天龄时大鼠海马PSD-95蛋白、NMDA受体亚基NMDAR1（NR1）、NMDAR2a （NR2a）、NMDAR2b （NR2b）表达情况。结果：1、七氟醚麻醉组大鼠成年后,水迷宫成绩总体差于对照组。七氟醚组大鼠的逃避潜伏期较对照组延长（n=15,p<0.05）。空间探索试验中,七氟醚组大鼠在目标象限停留时间较对照组短（n=15,p<0.05）,跨平台次数较对照组少（n=15,p<0.05）。2、2.5%七氟醚幼鼠麻醉4小时不影响其成年后海马神经元密度、形态。麻醉后7周,对照组大鼠及麻醉组大鼠CA1、CA3区及齿状回（DG区）有大量致密的锥体细胞及颗粒细胞,DG区有中等量神经元。两组海马神经元排列整齐,形态完整,轮廓界限清晰,胞浆内尼氏小体丰富,均无明显细胞肿胀或皱缩。两组海马神经元密度无明显区别（n=15,p>0.05）。3、2.5%七氟醚幼鼠麻醉4小时降低海马CA3区神经元树突棘密度。海马CA3区树突棘总体密度及蘑菇状树突棘密度,麻醉组较对照组降低（n=30, p<0.05）。CA1、DG区的树突棘总体密度及蘑菇状树突棘密度,两组比较无明显区别（n=30,p>0.05）。海马各区细杆状、粗棒状树突棘密度,两组比较无明显区别（n=30,p>0.05）。4、2.5%七氟醚幼鼠麻醉4小时,降低其成年后海马PSD-95蛋白表达。麻醉结束后即刻,PSD-95蛋白表达量两组无明显区别（n=15,p>0.05）。麻醉后7周,即大鼠56天龄时,麻醉组大鼠PSD-95蛋白表达量较对照组下降,差异有统计学意义（n=15,p<0.05）。5、2.5%七氟醚幼鼠麻醉4小时,增加麻醉后即刻大鼠海马的NR2a、NR2b表达,NRl无明显变化。麻醉处理后即刻,麻醉组NR2a、NR2b表达较对照组增加（n=15,p<0.05）,NR1无明显变化（n=15,p>0.05）。麻醉后7周,即大鼠56天龄时,两组NR1、NR2a, NR2b表达均无明显差异（n=15,p>0.05）。结论：2.5%七氟醚幼鼠麻醉4小时可造成其成年后海马功能受损。大鼠海马CA3区树突棘总体密度以及蘑菇状树突棘密度的减少,海马PSD-95蛋白表达的降低是其功能损害的结构基础。七氟醚麻醉后海马NMDA受体亚基NR2a、NR2b表达的上调可能介导了其神经毒性。