论文摘要
疼痛不仅是疾病的一种症状,对于慢性疼痛来说,本身也是一种疾病。如今疼痛已成为危害人类生命健康的重大隐患,包括偏头痛、风湿性关节炎、骨关节炎、癌性痛、神经性疼痛等,很多人因为这类慢性疼痛部分或全部的丧失工作能力。解除疼痛是医学上常议的话题,也是至今未解的课题,在临床上除治疗疾病本身外,主要是药物治疗以缓解疼痛,减轻痛苦。目前用于镇痛的药物主要有两类,一类是以阿片类为主的麻醉性镇痛药,由于产生很强的药物依赖性给人身及社会造成极大的危害;另一类是以阿斯匹林为代表的解热镇痛药（antipyretic-analgesic drugs）,属于环氧化酶抑制剂,目前临床广泛应用,此类药物虽不具成瘾性,但其也具有较多甚至是较严重的副作用。因此,研究开发镇痛作用强、毒副作用小的新型镇痛药为临床之急需。依据传统中医药理论,从中药中寻找新的具有扎实的临床用药经验、目标性强、研制周期短、花费资金少等多方面优势的镇痛药,是目前中医药研究发展的方向。赤雹果是经满族人民间长期应用,证明具有显著的镇痛作用的药材。并经本课题组的前期研究发现,赤雹果（The fruit of Thladiantha Dubia Bunge, FTDB）（葫芦科植物赤雹（Thladiantha Dubia Bunge, TDB）的成熟果实）具有很强的镇痛抗炎作用,无明显的副作用,毒性较低,是一种具有研究价值的镇痛药;大量的前期实验证明赤雹果水提物具有镇痛抗炎作用。为了进一步研究赤雹果有效部位及其镇痛作用机制,本研究对赤雹果的水提物进行了分离纯化,得到总有机酸。经过一系列的镇痛实验证实,赤雹果中总有机酸是其有效部位;镇痛作用部位主要在外周;抑制PGs合成是其主要作用机制。目的:本课题的研究目的是探讨赤雹果镇痛作用的有效部位及其作用机制。方法:1采用717树脂分离纯化赤雹果总有机酸。2采用小鼠扭体法、热板法等,比较FTDB水提物和总有机酸（FTDBP）的镇痛活性。3采用小鼠扭体法、热板法、大鼠浸尾法、炎性组织疼痛模型实验等,分析FTDBP的镇痛作用部位。4 FTDBP的镇痛作用机制研究4.1采用纳络酮拮抗实验,分析FTDBP的镇痛作用与阿片受体关系。4.2采用酒石酸锑钾致痛模型实验,测定小鼠腹腔液前列腺素（PGE2）含量;大鼠炎症疼痛模型,测定血清PGE2含量,分析FTDBP的镇痛作用与前列腺素关系。4.3采用酒石酸锑钾致痛法,测定大鼠脑组织NO含量方法,分析FTDBP的镇痛作用与NO关系。4.4在药物诱发痛经模型的实验中,记录每只小鼠在40min内的扭体次数和抑制率。分析FTDBP与小鼠痛经的关系。4.5 FTDBP对正常大鼠离体子宫平滑肌收缩作用实验,测定子宫平滑肌的收缩幅度与收缩频率,变化率%,并进行给药前后自身比较和组间比较。4.6 FTDBP对缩宫素所致大鼠离体子宫平滑肌强烈收缩影响的实验,测定子宫平滑肌的收缩幅度与收缩频率,变化率%,比较加药组与单纯缩宫素（0. 90u/ ml）组作用的差异。5以柠檬酸为指标,建立大鼠血清中柠檬酸Rp-HPLC测定方法来确定血液中总有机酸的含量。结果:1 717阴离子交换树脂分离、纯化赤雹果中总有机酸质量分数高于50%。2小鼠扭体法、热板法实验结果表明,FTDBP的镇痛作用明显优于FTDB。3在热板法48℃和浸尾法水温在50℃条件下,FTDBP能显著延长小鼠舔后足时间,及大鼠甩尾潜伏期;炎性组织疼痛模型实验只能明显提高大鼠炎性足痛阈;结合福尔马林实验,对晚期相疼痛作用更强,提示FTDBP镇痛作用部位主要在外周。4 FTDBP的镇痛作用机制初步研究4.1在纳络酮拮抗实验中,ip阿片受体拮抗剂纳络酮不能拮抗FTDBP的镇痛作用。4.2对酒石酸锑钾致扭体反应小鼠腹腔液中PGE2含量测定,同时对炎症疼痛模型中大鼠血清PGE2含量进行测定,结果表明FTDBP能明显降低小鼠腹腔液和大鼠血清中PGE2含量。4.3测定酒石酸锑钾致痛后大鼠脑组织中NO含量,结果表明,FTDBP在发挥镇痛作用的同时,可显著抑制脑组织NO的含量。4.4小鼠痛经模型中,己烯雌酚和缩宫素可以诱发小鼠的扭体反应。与对照组比较,FTDBP高、中剂量可以明显减少小鼠扭体次数,抑制小鼠痛经发生,阿司匹林也有明显抑制作用。4.5缩宫素（0.06u/ml）具有增强正常大鼠离体子宫平滑肌收缩的作用（P< 0.05） ;FTDBP高、中剂量也具有增强正常大鼠离体子宫平滑肌收缩的作用（P < 0. 05）。4.6 FTDBP高、中剂量可明显对抗缩宫素（0.90u/ ml）引起的离体子宫平滑肌强烈收缩作用。5色谱条件:色谱柱:Discovery C18（250mm×4.6mm,5μm）,大连华洋公司;流动相:0.04mol/L KH2PO4-H3PO4缓冲液-CH3OH（V:V= 97:3）;检测波长:214nm;柱温:室温;流速:0.8mL/min;进样量:10μL。在以上条件下,柠檬酸和血清内源物质分离较好。结论:1 717阴离子交换树脂能够较好地分离、纯化赤雹果中总有机酸。2 FTDBP的镇痛作用明显优于FTDB,镇痛作用的活性部位确定为FTDBP。3 FTDBP的镇痛作用部位主要在外周。4 FTDBP的镇痛作用不是通过内源性阿片肽系统介导,其抑制PG合成,可能是发挥外周镇痛作用的主要机制。另外,其镇痛作用机制部分与抑制NO等参与疼痛反应的炎症介质的生成有关。5 FTDBP对正常大鼠离体子宫平滑肌收缩具有增强作用。6 FTDBP对缩宫素（0.90u/ml）引起的离体子宫平滑肌强烈收缩具有对抗作用。7大鼠血清中柠檬酸Rp-HPLC测定方法简单易行,适合于柠檬酸的血药浓度的测定。
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