马鹿鹿茸上皮组织转录组研究

论文摘要

鹿茸是研究哺乳动物再生机理的最佳模型。为了深入研究鹿茸茸性上皮发育和再生的分子机理,本研究从东北马鹿(Cervus elaphus)的鹿茸上皮组织中提取总RNA,并利用Long SAGE技术对其进行转录组分析。研究结果表明:(1)此次研究得到SAGE标签序列共计4667个,其中1394个标签为上皮组织所特有,但是经人、老鼠和牛的参考文库对照筛选后,只得到703个具UniGene ID的标签,而其余691个标签无法给予确定,鹿茸茸性上皮组织中表达了许多现有数据库中所没有的表达序列标签(EST_S);(2)统计tags的表达丰度发现了其中表达丰度最高的10个tags中的9个都与角质细胞发育有关。(3)对具有UniGeneID的标签进行注释和功能分析,结果表明其中24.2%参与调控细胞周期,20.1%参与细胞代谢,其余分别参与细胞增殖与代谢、信号转导等,同时还存在约12%功能未知的基因。上述结果为以鹿茸上皮组织为模型进一步开展再生机理研究提供了基础数据。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 绪论
• 1.1 引言
• 1.2 鹿茸角的生长发育及相关分子机理的研究现状
• 1.2.1 初茸的发育、再生和脱落
• 1.2.2 鹿茸角的再生
• 1.2.3 鹿茸角的脱落
• 1.2.4 鹿茸再生—茸芽的形成
• 1.2.5 鹿茸再生:软骨和骨的生长
• 1.2.6 间充质生长区域
• 1.2.7 鹿茸角软骨
• 1.2.8 软骨和骨的吸收
• 1.2.9 骨形成
• 1.2.10 鹿茸角的研究展望
• 1.3 序列基因表达分析技术的研究进展
• 1.3.1 SAGE的基本原理和操作方法
• 1.3.2 SAGE技术的改进和完善
• 1.3.3 SAGE技术的应用
• 1.3.4 SAGE技术的发展
• 2 方法与步骤
• 2.1 材料
• 2.1.1 实验动物
• 2.1.2 主要生化试剂
• 2.1.3 仪器
• 2.2 SAGE文库的构建
• 2.2.1 RNA的抽提及mRNA的分离
• 2.2.2 接头连接的cDNA片段的制备
• 2.2.3 克隆及测序
• 3 结果
• 3.1 取样点
• 3.2 总RNA提取
• 3.3 SAGE中130 tag的形成
• 3.4 标签的形成
• 3.5 多标签产物的形成
• 3.6 克隆的PCR结果
• 3.7 对插入片段符合实验要求的多标签序列进行测序
• 4 讨论
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢