Cyclopamine对银屑病SCID小鼠模型的影响及其治疗银屑病机制的初步研究

论文摘要

银屑病是皮肤科一种常见的、具有遗传倾向的慢性炎症性疾病。在外来抗原刺激下,人类白细胞分化抗原4+（Clusters of differentiation,CD4+）T细胞激活,分泌白介素（Interleukin,IL）-2、6、8,刺激角质形成细胞（Keratinocyte,KC）增殖,被激活的KC可分泌IL-1、6、8,再作用于CD4+T细胞;或通过IL-6、8作用于自身,另外,活化的CD4+T细胞分泌肿瘤坏死因子α（Tumor necros factor- alpha,TNF-α）、干扰素γ（gamma Interferon,IFN-γ）使KC分泌细胞间黏附分子（Intercellular adhesion molecule,ICAM）-1,介导KC与CD4+T细胞黏附,使病变周而复始。Hedgehog（Hh）信号通路是一个调控胚胎发育的信号转导途径,胚胎发育完成后仍可继续调控细胞的生长、增殖和分化。Hh信号通路的激活可以使KC表现出一些银屑病的病理特点,如使KC增殖、角化异常、角蛋白（Keratin,K）14表达水平增高、表皮生长因子受体（Epidermal growth factor receptor,EGFR）磷酸化增加等。该信号通路的高效、特异性抑制剂cyclopamine,可以迅速清除银屑病皮损,在银屑病的治疗中有显著的疗效。我们曾发现Hh信号通路在银屑病皮损中处于过度激活状态。为进一步确定cyclopamine治疗银屑病的机理,本实验以银屑病SCID小鼠模型、正常人角质形成细胞系（Hacat）为研究对象,观察cyclopamine作用后Hacat细胞因子分泌表达的变化及移植皮片组织病理的变化。本研究的主要实验方法及结果如下:一.银屑病SCID小鼠动物模型的构建切取银屑病患者皮损移植给SCID小鼠,移植后10天,移植皮片周围分点皮下注射经刀豆蛋白A（ConcanavalinA,ConA）刺激的银屑病患者外周血单一核细胞（Peripheral blood monouclear cells,PBMCs）,细胞数约为4×106/鼠。移植后15天,绝大多数移植皮片外观和组织病理学特征呈明显的银屑病改变。我们根据Baker评分法,对所有的移植模型进行评分,结果为8.278±0.244（典型的银屑病皮损评分在4.0-10.0之间）。因此从大体表现、组织病理方面,移植皮片均能保留银屑病的表型特点,表明银屑病SCID小鼠动物模型构建成功。二.Cyclopamine对银屑病SCID小鼠模型的作用1.分组及给药将构建好的动物模型随机分为3组,每组4只,分别对应以下处理:5mmol/mL cyclopamine治疗组:cyclopamine加DMSO、生理盐水稀释,DMSO终浓度40%,均匀涂抹于移植皮片,每次给药50μL,每天给药两次,连续给药15天;5mmol/mL tomatidine对照组:以tomatidine取代cyclopamine,剂量、配制及外用方法同cyclopamine组;空白对照组:DMSO、生理盐水不加cyclopamine,用法同上。2.结果治疗后15天比较各组治疗效果:移植皮片外观显示cyclopamine组治疗后移植皮片红斑、鳞屑消失,几乎接近于正常皮肤,组织病理学显示表皮显著变薄、炎细胞浸润减轻、组织学评分显著降低;tomatidine对照组和空白对照组皮损保持明显红斑,可见白色鳞屑,同治疗前相比无明显改变,组织学显示表皮厚度几乎保持不变,尽管角化不全消失,部分颗粒层出现,但仍见角化过度、棘层肥厚、表皮突延长、真皮浅层毛细血管扩张充血及炎细胞浸润等银屑病改变。本部分研究外用cyclopamine进行治疗,发现其可明显促进SCID小鼠银屑病样皮损的恢复,具有良好的治疗效果,为cyclopamine的银屑病治疗向临床应用奠定了基础,为银屑病的治疗提供新的方向。三.Cyclopamine处理后Hacat细胞因子分泌表达的变化本部分实验采用ELISA和RT-PCR方法检测Hacat在cyclopamine处理后IL-6、8、TNF-α分泌表达的变化。结果显示:1.Hacat在cyclopamine处理12h、24h、48h后用ELISA检测细胞培养上清中IL-6、8、TNF-α的分泌明显低于空白组,差异有统计学意义,尤以5μmol/mL cyclopamine组为著。2.Hacat在cyclopamine处理12h、24h、48h后用RT-PCR方法检测细胞中IL-8的mRNA表达明显下降,尤以5μmol/mL cyclopamine组为著。Cyclopamine可明显降低Hacat IL-6、8、TNF-α的分泌表达,提示cyclopamine治疗银屑病的机理可能为cyclopamine能降低Hacat分泌IL-6、8、TNF-α这些在银屑病的发病过程中起重要作用的细胞因子。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 文献回顾
• 一、银屑病的发病机理
• 二、银屑病动物模型的研究进展
• 1 自发动物模型
• 2 诱发性动物模型
• 3 基因突变鼠模型
• 4 转基因动物模型
• 5 银屑病患者皮损－免疫缺陷鼠嵌合体模型
• 6 T细胞皮内注射构建银屑病动物模型
• 三、Hedgehog（Hh）信号转导通路
• 1 Hh信号转导通路的组成
• 2 Hh信号转导通路的调节
• 3 Hh信号转导通路与银屑病
• 正文
• 一、银屑病SCID小鼠模型的构建
• 1 实验材料和仪器设备
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 二、Cyclopamine对银屑病SCID小鼠模型的治疗作用
• 1 实验材料和仪器设备
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 三、Cyclopamine对Hacat细胞因子分泌表达的影响
• 1 实验材料和仪器设备
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 小结
• 参考文献
• 个人简历和研究成果
• 致谢