论文摘要
①目的：构建原核表达系统对狂犬病毒（RV）CVS株的核蛋白（NP）进行表达和纯化，并在大肠杆菌中表达对其进行初步的抗原性检测。表达的目的蛋白为进一步研发狂犬血清学检测试剂盒提供抗原。②方法：以重组质粒Teasy—RVNP为模板，利用PCR方法扩增狂犬病毒（RV）CVS株核蛋白（NP）的DNA片段，并重组入原核高效表达载体pET-15b。用酶切电泳验证重组结果的正确性；并通过测序检查质粒重组后序列有无变化。重组质粒转化宿主菌BL21，经IPTG诱导表达目蛋白进行表达。研究诱导温度、诱导时间、诱导剂浓度等对表达蛋白量的影响，对蛋白表达条件进行优化。并对表达得到得包涵体蛋白进行了洗涤。后用SDS-PAGE与Western-blot鉴定其抗原性。③结果：经过筛选得到含狂犬病毒N基因片断的原核表达载体，测序检查证明目的基因序列无变化。获得表达狂犬病毒核蛋白的重组菌，IPTG诱导后SDS—PAGE电泳结果表明，在51KDa处有一条蛋白表达带，大小与预期相符。Western-blot分析证明，51KDa蛋白带可与抗体血清发生特异性反应。Western—blot鉴定表明重组蛋白有良好的抗原性和特异性。④结论：成功构建了pET15b-NP原核表达载体，表达产物为狂犬病毒核蛋白，初步洗涤了包涵体蛋白，为生产纯度高且价廉的RV NP抗原奠定了基础。为进一步研发狂犬血清学检测试剂盒提供抗原，为制备测定RVNP抗体的免疫诊断试剂提供了条件。