论文题目: 陆英药效物质基础研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 药物分析学
作者: 廖琼峰
导师: 毕开顺,陈晓辉
关键词: 陆英,药效物质基础,质量控制方法,提取工艺,药物动力学
文献来源: 沈阳药科大学
发表年度: 2005
论文摘要: 本研究以民间常用抗肝炎中药陆英为研究对象，观察了不同溶剂制备的陆英提取物对CCl4诱导的小鼠急性肝损伤的影响，确定75％乙醇为最佳提取溶剂，经系统溶剂萃取和大孔吸附树脂纯化，确立了陆英75％乙醇提取物的乙酸乙酯层和经大孔吸附树脂纯化后30％乙醇洗脱物为主要有效部位，并进行了初步药效学试验。采用多种色谱分离技术对有效部位进行了分离纯化，得到了6个单体化合物，通过波谱分析结合理化性质，鉴定了它们的化学结构，分别为：β-谷甾醇、豆甾醇、齐墩果酸、熊果酸、山奈酚-3-O-β-D-（6-O-乙酰基-葡萄吡喃糖）-7-O-β-D-葡萄吡喃糖苷和山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-葡萄糖苷，其中2个山奈酚葡萄糖苷为首次从该植物中分离得到的已知化合物。对得到的6个单体化合物进行体外肿瘤细胞生长抑制试验，结果表明熊果酸和齐墩果酸对所选的Bel-7402肝癌细胞生长具有一定的抑制作用。本研究建立了同时测定陆英中活性成分熊果酸和齐墩果酸含量的反相高效液相色谱分析方法，熊果酸和齐墩果酸分别在2.3～92.0μg·mL-1（r=0.9999）和2.6～104.0μg·mL-1（r=0.9999）范围内线性关系良好，回收率分别为97.6％（RSD=2.1％）和102.1％（RSD=1.7％）。建立了测定陆英中活性成分绿原酸、咖啡酸和2种山奈酚葡萄糖苷的反相高效液相色谱分析方法，绿原酸、咖啡酸、山奈酚-3-O-β-D-（6-O-乙酰基-葡萄吡喃糖）-7-O-β-D-葡萄吡喃糖苷和山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-葡萄糖苷分别在12.0～240.0（r=0.9992），0.40～8.00（r=0.9992），1.18～23.60（r=0.9982）和1.19～23.80μg·mL-1（r=0.9993）范围内线性关系良好，回收率分别为100.9％（RSD=3.8％）、98.3％（RSD=2.8％）、99.2％（RSD=3.3％）和96.3％（RSD=3.2％）。采用气相色谱-质谱（GC-MS）联用技术对陆英中的挥发油进行分析，分离出33个组分，鉴定出25个化合物，占挥发油总量的92.8％。采用正交试验设计，对陆英提取工艺进行优化。以熊果酸、齐墩果酸和绿原酸含量及浸膏得率为考察指标，对提取溶剂用量、提取时间和提取次数3个因素进行优化，确定陆英最佳提取工艺为加入8倍量75％乙醇，回流提取3次，每次1h。建立了测定大鼠血浆中熊果酸含量的LC-MS分析方法，以甘草次酸为内标，血浆经醋酸酸化，正己烷-二氯甲烷-异丙醇（20：10：1，v／v／v）为提取溶剂，熊果酸在10～1000 ng·mL-1（r≥0.9960）范围内线性关系良好。方法的定量下限为10 ng·mL-1，日内精密度RSD≤7.8％，日间精密度RSD≤8.1％，准确度RE为±4.3％，平均回收率为83.6％。比较研究了大鼠灌胃给予陆英提取液和相当于等量的熊果酸对照品溶液后的药物动力学，测定了熊果酸的血药浓度-时间曲线，计算其相应药物动力学参数。大鼠灌胃给予熊果酸对照品后，大鼠血浆中几乎检测不到熊果酸。而给予陆英提取液后熊果酸在1 h左右达峰，达峰浓度Cmax约为294.8 ng·mL-1，消除半衰期t1／2为4.3 h。建立了测定大鼠血浆中绿原酸含量的反相高效液相色谱分析方法，以葛根素为内标，血浆经甲醇沉淀蛋白后进样分析。绿原酸在42～2100 ng·mL-1（r≥0.9957）范围内线性关系良好。方法的定量下限为42 ng·mL-1，日内精密度RSD≤6.7％，日间精密度RSD≤7.2％，准确度RE为±2.6％，平均回收率为84.4％。大鼠灌胃给予陆英提取液后，发现绿原酸在大鼠体内中吸收快，0.36 h左右达峰，达峰浓度Cmax约为670.9 ng·mL-1，消除半衰期t1／2为4.85 h。本研究在中医药学理论和实践的指导下，将中药学、分析化学、药理学和计算机技术相结合，初步探讨了中药陆英药效物质基础，确定其质量评价指标，优化其提取工艺，建立了陆英的质量控制方法。研究了大鼠灌胃给予陆英提取物血浆中熊果酸和绿原酸的药物动力学，探索有效成分在体内的动态过程，为中药现代化做了有意义的探索。
论文目录:
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
1.1 中草药治疗乙型肝炎的研究概况
1.2 陆英的研究概况
1.2.1 陆英的基源
1.2.2 陆英的本草考证
1.2.3 陆英的化学成分研究
1.2.4 陆英的药理作用研究
1.3 本研究立题依据与思路
第二章 陆英有效部位的筛选与抗肝损伤作用研究
2.1 药理指标的选择
2.2 提取溶剂的选择
2.2.1 实验材料
2.2.2 样品溶液的制备
2.2.3 对CCl_4诱导的小鼠肝损伤的影响
2.3 有效部位的筛选
2.3.1 样品溶液的制备
2.3.2 对CCl_4诱导的小鼠肝损伤的影响
2.4 有效部位药效学初步研究
2.4.1 样品溶液的制备
2.4.2 对CCl_4致小鼠急性肝损伤的影响
2.4.3 对D-半乳糖胺盐酸盐大鼠急性肝损伤的影响
2.4.4 对小鼠非特异性免疫功能的影响(碳粒廓清法)
2.5 讨论
第三章 陆英有效部位中化学成分的分离与活性研究
3.1 概述
3.2 实验材料
3.3 陆英中有效部位化学成分的提取与分离
3.4 化合物的结构鉴定
3.5 各单体化合物对人肝癌细胞的生长抑制试验
3.5.1 溶液的配制
3.5.2 肿瘤细胞的体外培养
3.5.3 MTT法的基本原理
3.5.4 MTT法测定药物的抗肿瘤作用
3.5.5 结果
3.5.6 讨论
第四章 陆英质量控制方法与提取工艺研究
4.1 陆英质量控制方法研究
4.1.1 陆英中齐墩果酸和熊果酸同时含量测定方法的建立
4.1.2 陆英中绿原酸、咖啡酸和2种山奈酚葡萄糖苷同时含量测定方法的建立
4.1.3 陆英中挥发油的GC-MS分析
4.2 陆英提取工艺研究
4.2.1 实验设计
4.2.2 浸膏得率的测定
4.2.3 样品溶液的测定
4.2.4 实验结果分析
4.2.5 验证实验
第五章 陆英药动学研究
5.1 中药药代动力学研究进展
5.2 实验材料
5.3 血浆样品中熊果酸分析方法的建立
5.3.1 色谱条件
5.3.2 质谱条件
5.3.3 血浆样品的预处理
5.3.4 分析方法的确证
5.4 熊果酸的药物动力学研究
5.4.1 灌胃样品的制备
5.4.2 血浆样品的采集
5.4.3 药动学研究结果
5.4.4 讨论
5.5 血浆样品中绿原酸分析方法的建立
5.5.1 色谱条件
5.5.2 血浆样品的预处理
5.5.3 分析方法的确证
5.6 绿原酸的药物动力学研究
5.6.1 灌胃样品的制备
5.6.2 血浆样品的采集
5.6.3 药动学研究结果
5.6.4 讨论
第六章 结果与讨论
参考文献
附图
致谢
个人简历
发布时间: 2006-12-14
参考文献
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