论文摘要
目的利用乳源免疫调节肽（PGPIPN）在人卵巢癌细胞株（SKOV3）进行受体的筛选、鉴定及其功能的初步研究。方法在激光共聚焦显微镜下，用异硫氰酸荧光素（FITC）标记PGPIPN，作用于SKOV3观察其细胞定位；培养SKOV3细胞从中提取PGPIPN的受体或作用位点蛋白；PGPIPN作为亲和层析的配基，通过NHS-activated亲和层析柱进行分离和纯化受体；真空冷冻干燥仪浓缩蛋白；SDS-PAGE初步验证筛选结果；经电喷雾质谱法及生物信息学对条带蛋白进行测序和分析；荧光标记肽与受体的结合试验，验证受体和PGPIPN的结合性；利用MTT法将一定浓度的PGPIPN和不同浓度的受体与卵巢癌细胞共孵育，观察对细胞增殖/凋亡可能产生的影响。结果在激光扫描共聚焦显微镜下观察荧光标记肽结合于SKOV3的胞膜上；通过提取膜蛋白和亲和层析法成功筛选了特异性结合的受体；通过电喷雾质谱法初步确定性质相似、功能相关蛋白，可能为ATP合酶、basigin等；荧光标记肽与受体的结合试验验证了受体的特异性；MTT结果显示：在不加受体时，PGPIPN能抑制SKOV3增殖，当PGPIPN、受体与卵巢癌细胞共孵育时，PGPIPN抑制SKOV3增殖明显减弱（P<0.05或0.01）。结论PGPIPN能抑制SKOV3的增殖并诱导细胞凋亡的作用位点位于细胞膜上，其抗癌作用可能通过胞膜结合蛋白而启动信号转导通路，为进一步探讨其抗癌机制奠定了基础。
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