抗人CD19单链抗体-CD80融合蛋白的构建与表达

论文题目: 抗人CD19单链抗体-CD80融合蛋白的构建与表达

论文类型: 博士论文

论文专业: 临床内科

作者: 陈森

导师: 王建祥

关键词: 单链抗体,融合蛋白

文献来源: 中国协和医科大学

发表年度: 2005

论文摘要: 急性淋巴细胞白血病（ALL）是血液系统常见恶性疾患之一，B细胞性ALL（B-ALL）占ALL的70—80％，在儿童恶性血液病中尤为多见。目前成人ALL的疗效较差、生存期短，单独应用联合化疗方法难以取得满意的疗效，需要结合骨髓移植、生物治疗及免疫治疗等手段进行综合治疗。研究表明，ALL白血病细胞表面免疫共刺激分子B7.1表达低下或缺乏，是导致白血病细胞不能被机体细胞毒性T细胞（CTL）有效地识别杀伤，从而逃逸宿主免疫监视的重要原因之一。然而，几乎所有的B-ALL病例均表达CD19表面抗原。因此，可以利用CD19表面抗原作为ALL白血病细胞的表面标记，构建抗人CD19单链抗体（scFv）-B7.1融合基因、表达融合蛋白，通过融合蛋白中抗人CD19scFv，将B7.1结合到ALL白血病细胞表面，刺激肿瘤特异性CTL细胞活化，从而起到杀伤白血病细胞的作用。 HIT19a是血研所研制的鼠源性抗人CD19的单克隆抗体，并已获得国际人类白细胞分化抗原协作组会议正式命名。我们利用RT-PCR技术分别克隆了抗人CD19单克隆抗体HIT19a的轻、重链可变区基因，通过overlap PCR方法组装成抗人CD19单链抗体（抗CD19 scFv）。将获得的抗体基因克隆到具有强启动子的PET28a（+）载体上，应用IPTG诱导表达，纯化的表达产物经证明具有与靶抗原人类CD19特异结合的能力。解离常数（Kd值）为1.7×10-8mol/L（R2=0.99）通过流式细胞仪检测，发现在一个EB病毒感染的白血病患者的骨髓单个核细胞中表达CD80（B7.1）抗原。我们应用RT-PCR技术成功克隆其cDNA编码区序列。基因测序显示序列正确。在此基础上，利用（人血清白蛋白）HSA的D3区中不含半胱氨酸且极性较高的一段基因序列作为连接肽，将抗人CD19单链抗体及人类细胞表面抗原CD80基因分别经酶切、纯化后以两种不同的组合方式克隆至原核表达载体PET22b（+）中，经IPTG诱导，在大肠杆菌内获得了融合蛋白的分泌性表达。两种融合蛋白的成功构建与表达，为下一步探讨血液肿瘤的免疫治疗机制奠定了基础

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前言

材料和方法

实验结果

讨论

结论

参考文献

综述

参考文献

致谢

发布时间: 2006-10-13

参考文献

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抗人CD19单链抗体-CD80融合蛋白的构建与表达

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