表没食子儿茶素没食子酸酯稳定性对其抗癌细胞增殖的影响

论文摘要

茶是世界范围内最流行的饮品之一。在它的诸生物学功能当中，抗肿瘤作用受到了最大的关注。到目前为止，茶中活性成分及其抗肿瘤机制尚不清楚。表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate，EGCG）是茶活性成分当中含量最多的一种，同时，在抑制肿瘤及相关研究中表现的活性也最强。通过EGCG对细胞系作用的研究，获得了大量关于茶生物学活性可能机制的信息。在许多体外实验中，指标的检测通常是在EGCG加入到培养基几个小时甚至几天以后，因此，很难判断活性物质的主要作用靶点以及明确作用机制。一些研究表明，EGCG在培养基中会发生自氧化作用，其半衰期很短；自氧化过程中会产生超氧自由基，而超氧化物歧化酶（SOD）对其具有很好的清除作用。在本研究中，用MTT方法检测EGCG对人结肠癌细胞HT-29、人乳腺癌细胞系MCF-7、人宫颈癌细胞Hela三种细胞生长的影响；通过检测培养基中乳酸脱氢酶（LDH）的活性，判断EGCG对这三种细胞的毒性作用；用流式细胞仪检测EGCG对人结肠癌细胞HT-29的凋亡诱导情况；通过培养基中是否含有SOD判断SOD对上述研究的影响。用HPLC和LC／MS方法判断EGCG在培养基中的稳定性。MTT结果表明：EGCG对HT-29、MCF-7和Hela三种细胞生长的抑制作用呈现浓度依赖性。培养基中加入SOD后，EGCG对这三种细胞生长的抑制作用增强。培养中LDH的活性在加入SOD后升高，表明在SOD存在的情况下EGCG对细胞的毒性作用增强。HT-29细胞在EGCG作用下凋亡率低，SOD加入后使EGCG促凋亡作用有所上升。EGCG在培养这三种细胞的培养基中的半衰期大约为1h或45min；加入SOD后，EGCG的半衰期提高到8h，表明SOD使培养基中EGCG的稳定性增强。LC／MS分析表明：EGCG在本研究中的自氧化产物可能含有P2（分质量884）和脱氢二聚体（分子量912）。可见，SOD使EGCG的稳定性提高，使其抑制肿瘤细胞增殖的作用增强。因此，在以后有关EGCG在细胞培养基中的研究不能忽视其不稳定性和自养化作用，而SOD可以加入到研究体系中使EGCG的稳定性提高。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 参考文献
• 2 文献综述
• 2.1 茶叶的保健功能
• 2.1.1 茶叶的活性成分
• 2.1.2 茶叶的保健功能
• 2.2 EGCG的抗肿瘤作用
• 2.2.1 EGCG与肠癌
• 2.2.2 EGCG与乳腺癌
• 2.2.3 EGCG与宫颈癌
• 2.3 EGCG的抗肿瘤机制
• 2.3.1 对MAP激酶和AP-1的抑制作用
• 2.3.2 阻断生长因子受体调解的途径
• 2.3.3 细胞周期阻滞作用
• 2.3.4 核因子κB（NF-κB）信号通路的抑制
• 2.3.5 细胞凋亡影响
• 2.3.6 通过表达基因EGCG识别的信号转导机制
• 2.3.7 花生四烯酸代谢异常的阻抑
• 2.3.8 蛋白酶活性的抑制
• 2.3.9 EGCG其它作用靶点
• 2.4 本论文的研究意义和主要工作
• 参考文献
• 3 EGCG抗肿瘤活性研究
• 3.1 实验材料与设备
• 3.1.1 实验材料
• 3.1.2 实验设备
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 培养用液配置
• 3.2.2 肿瘤细胞的培养
• 3.2.3 MTT法检测细胞存活率
• 3.2.4 细胞毒性试验
• 3.2.5 流式细胞仪检测细胞凋亡
• 3.3 结果分析
• 3.3.1 EGCG对三种细胞生长影响
• 3.3.2 EGCG对三种细胞的毒性作用
• 3.3.3 EGCG对HT-29细胞凋亡影响
• 3.4 讨论
• 参考文献
• 4 EGCG稳定性分析
• 4.1 实验材料与设备
• 4.1.1 实验材料
• 4.1.2 实验设备
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 肿瘤细胞的培养
• 4.2.2 EGCG稳定性分析（HPLC法）
• 4.2.3 EGCG液质联用分析
• 4.3 结果分析
• 4.3.1 EGCG稳定性分析
• 4.3.3 EGCG液质联用分析
• 4.4 讨论
• 参考文献
• 结论与展望
• 结论
• 创新及意义
• 展望
• 攻读硕士学位期间发表学术论文情况
• 致谢