大青叶黄酮化合物的分离鉴定和含量测定方法研究

论文摘要

以大青叶为研究对象，利用硅胶柱色谱法、聚酰胺柱色谱法、Sephadex LH-20柱色谱法、制备高效液相色谱法及反复重结晶等手段对其黄酮化合物进行分离纯化，并应用化学性质和质谱、波谱分析方法对其进行结构鉴定，共分离并鉴定了8个黄酮类化合物：异金雀花素（化合物1）、异金雀花素-3”-O-吡喃葡萄糖苷（化合物2）、异牡荆素（化合物3）、异牡荆素-3”-O-吡喃葡萄糖苷（化合物4）、异荭草苷-3”-O-吡喃葡萄糖苷（化合物5）、异牡荆素-6”-O-吡喃葡萄糖苷（化合物6）、异荭草苷（化合物7）和肥皂草苷（化合物8）。其中，化合物1、2、4、6、7和8为首次从菘蓝中分离得到；化合物5为新化合物。采用紫外-可见分光光度法，以芦丁为对照品，建立大青叶总黄酮的含量测定方法。结果芦丁在11．56～57．60μg·mL-1范围内线性关系良好（r=0．9998），平均回收率为100．2％（RSD=1．4％）。采用正交试验设计法，以大青叶总黄酮含量为评价指标，对大青叶总黄酮的样品制备方法进行考察，确定最佳样品制备方法为用20倍量的60％乙醇，超声提取4次，每次30 min。使用SOD试剂盒，对8个黄酮化合物及大青叶总黄酮提取液体外清除超氧阴离子自由基的能力进行测定，评价它们的抗氧化活性。结果8个黄酮化合物及大青叶总黄酮提取液均有不同程度的抗氧化活性。建立了同时测定大青叶中6种黄酮类成分：异金雀花-3”-O-吡喃葡萄糖苷、异牡荆素-3”-O-吡喃葡萄糖苷、异荭草苷-3”-O-吡喃葡萄糖苷、异金雀花素、异牡荆素和异荭草苷的毛细管电泳分析方法。异金雀花-3”-O-吡喃葡萄糖苷、异牡荆素-3”-O-吡喃葡萄糖苷、异荭草苷-3”-O-吡喃葡萄糖苷、异金雀花素、异牡荆素和异荭草苷浓度分别在33．0～660μg·mL-1、10．0～200μg·mL-1、14．5～290μg·mL-1、27．5～550μg·mL-1、33．0～660μg·mL-1和12．0～240μg·mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系。方法回收率分别为97．7％（RSD=1．8％）、97．5％（RSD=1．9％）、95．3％（RSD=3．4％）、91．6％（RSD=2．0％）、96．3％（RSD=3．1％）和98．3％（RSD=1．8％）。该方法为大青叶质量控制提供了新方法。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 1.1 大青叶的研究现状
• 1.1.1 大青叶的本草考证
• 1.1.2 大青叶的化学成分
• 1.1.3 大青叶的药理作用
• 1.1.4 大青叶质量控制方法研究现状
• 1.2 抗氧化剂与自由基概述
• 1.2.1 自由基对人体的危害
• 1.2.2 抗氧化剂
• 1.2.3 黄酮类化合物抗氧化活性研究进展
• 1.3 毛细管电泳及其在中药分析中的应用
• 1.3.1 毛细管电泳
• 1.3.2 毛细管电泳的几种模式
• 1.3.3 毛细管电泳法在中药分析中的应用
• 1.4 本课题研究设计思路
• 第二章 大青叶黄酮化合物的分离与鉴定
• 2.1 实验部分
• 2.1.1 仪器与试药
• 2.1.2 大青叶黄酮化合物的提取分离
• 2.2 结果与讨论
• 2.2.1 大青叶黄酮化合物的结构鉴定
• 2.2.2 讨论
• 2.3 小结
• 第三章 大青叶总黄酮的含量测定
• 3.1 实验部分
• 3.1.1 仪器、试剂与试药
• 3.1.2 大青叶药材样品的收集
• 3.1.3 溶液的制备
• 3.2 结果与讨论
• 3.2.1 大青叶总黄酮样品制备方法考察
• 3.2.2 大青叶总黄酮的含量测定
• 3.3 小结
• 第四章 大青叶黄酮化合物及提取物的抗氧化作用
• 4.1 实验部分
• 4.1.1 实验原理
• 4.1.2 仪器、试剂与试药
• 4.1.3 溶液的制备
• 4.1.4 实验方法
• 4.2 结果与讨论
• 4.2.1 黄酮化合物的类SOD测定结果
• 4.2.2 大青叶总黄酮提取物的类SOD测定结果
• 4.2.3 黄酮化合物抗氧化作用机制与构效关系推断
• 4.2.4 其他
• 4.3 小结
• 第五章 毛细管电泳法测定大青叶中六种黄酮类成分
• 5.1 实验部分
• 5.1.1 仪器、试剂与试药
• 5.1.2 大青叶药材样品的收集
• 5.1.3 电泳条件
• 5.1.4 溶液的制备
• 5.2 结果与讨论
• 5.2.1 背景电解质的选择
• 5.2.2 标准曲线的绘制
• 5.2.3 系统的精密度试验
• 5.2.4 重复性试验
• 5.2.5 回收率试验
• 5.2.6 供试品溶液稳定性试验
• 5.2.7 样品的测定
• 5.3 小结
• 第六章 结论
• 参考文献
• 附图
• 发表文章目录
• 致谢