青岛文昌鱼肌肉生化分析及其功能基因的研究

论文摘要

本论文主要对青岛文昌鱼(Branchiostoma belcheri tsingtauense)肌肉组织进行了酶组织化学实验和电镜观察,分离了青岛文昌鱼肌球蛋白重链基因异构体并将其重组表达;克隆了青岛文昌鱼新生肽链相关复合体α亚基基因,并检测了其时空表达情况。根据NADH酶组化实验可以将文昌鱼的肌细胞分成两类,即蓝紫色、有氧代谢型的浅层肌和基本不着色、无氧代谢型的深层肌。电镜观察进一步验证了酶组化的结果,并首次发现浅层肌和中间肌细胞肌丝密度明显大于深层肌。而mATPase组化实验没能对肌纤维进行分类,这也许是由于实验的pH条件不是文昌鱼的肌纤维ATP酶活的pH;或者其很容易失活;或者该酶的活化需要不同于其它动物的金属离子的缘故。克隆到三条对应于肌球蛋白重链尾部保守区的异构体,其中两条是首次报道。这三条异构体都属于II类肌球蛋白并和脊椎、无脊椎动物的多种类型的肌球蛋白分子有较高的同源性;利用原核表达系统对异构体进行重组表达,获得了可溶性的表达蛋白,为制备文昌鱼肌球蛋白特异性抗体打下了基础。从青岛文昌鱼成体中分离到了新生肽链相关复合体α亚基的全长cDNA,并检测了其时空表达情况。对其cDNA 5’端的基因组序列进行预测和比较分析,没有发现肌肉特异性外显子的存在。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 引言
• 1 文昌鱼-研究脊椎动物起源和进化的理想模式生物
• 2 横纹肌的结构及收缩机制
• 3 横纹肌的分类及研究进展
• 4 新生肽链相关复合体（NAC）概述及其在肌肉发育中的作用
• 5 文昌鱼肌肉研究概述
• 第二章 青岛文昌鱼成体躯干肌的酶组织化学与电镜分析
• 1 材料与方法
• 2 实验结果
• 2.1 冷冻切片NADH酶染色结果
• 2.2 电镜下超微结构观察结果
• 2.3 冷冻切片mATPase 组化染色结果
• 3 讨论
• 第三章 青岛文昌鱼MyHC 基因异构体的克隆、重组表达与分析
• 1 材料与方法
• 2 实验结果
• 2.1 青岛文昌鱼MyHC 基因片段的克隆
• 2.2 青岛文昌鱼MyHC 基因片段的原核重组表达
• 3 讨论
• 第四章 青岛文昌鱼αNAC 基因的克隆、表达与进化分析
• 1 材料与方法
• 2 实验结果
• 2.1 特异性引物的设计
• 2.2 青岛文昌鱼αNAC 基因的克隆与系统进化分析
• 2.3 αNAC 的时空表达情况
• 3 讨论
• 参考文献
• 发表文章情况
• 致谢