利用荧光原位杂交对人类植入前胚胎行性别诊断的研究

论文摘要

第一部分激光法活检对小鼠体外受精胚胎后期发育的影响目的以昆明（KM）小白鼠体外受精（IVF）胚胎为研究对象,尝试应用激光法活检鼠胚,探讨活检技术对胚胎早期发育的影响。方法对促排卵获取的小鼠卵母细胞进行体外受精和培养,然后用激光法活检收集的4细胞和8细胞胚胎,最后观察活检后胚胎的发育情况。结果1.共获卵母细胞360枚,受精率和卵裂率分别为92.0%和94.3%。2.4-细胞胚胎活检组的囊胚形成率及孵出囊胚率分别为76.6%和65.6%,8-细胞胚胎活检组的囊胚形成率及孵出囊胚率为70.4%和59.3%,分别与未活检对照组相比,差异无显著性（P＞0.05）;4-细胞活检组和8-细胞活检组的囊胚形成率及孵出囊胚率间相比较,也无显著性差异（P＞0.05）。结论激光法对小鼠4细胞或8细胞胚胎进行单卵裂球活检,不影响胚胎的后期发育,是一项有效的胚胎卵裂球活检方法。第二部分人类胚胎单卵裂球固定方法的改良目的以人类多精受精胚胎单卵裂球为对象,对传统低渗固定法进行改良,探讨一种更简便效率更高的固定方法。方法收集30枚人类多精受精胚胎激光打孔后去除透明带,将获得的完整卵裂球按传统低渗固定法和直接固定法进行固定后行X,Y染色体双色荧光原位杂交,比较固定率和杂交率。结果1.固定卵裂球共171枚。低渗固定法（A组）固定80枚,成功68枚,成功率为85.0%。直接固定法（B）组固定91枚,成功82枚,成功率为90.1%。两组有显著性差异。2.A组杂交率为77.5%（/每卵裂球数）,91.2%（/每核数）,B组杂交率为83.5%（/每卵裂球数）92.7%（/每核数）。两组无显著性差异。结论直接固定法简化了固定步骤,降低了细胞丢失率,为较理想的单个卵裂球间期核固定技术。第三部分用FISH对人类胚胎进行性别诊断的研究目的应用双色荧光原位杂交技术分析植入前胚胎性染色体,为植入前遗传学诊断的临床开展建立性别诊断的技术。方法将激光活检法活检出的卵裂球用直接固定法固定,然后应用荧光原位杂交进行性别诊断。FISH步骤包括变性、杂交、洗脱和荧光显微镜观察结果进行分析等。用淋巴细胞作为对照分析。结果1.对40枚人类卵裂期胚胎进行了活检,成功活检36枚,破坏胚胎4枚,活检成功率为90%（36/40）。2.对90枚卵裂球进行固定,其中83枚被成功固定,固定成功率为92.2%。3.对固定成功的83枚卵裂球细胞行双色FISH性别鉴定,78枚细胞见到荧光信号,杂交率为94.0%。活检的40枚胚胎中有34枚获得了可分析FISH结果,占活检胚胎的85%（34/40）,占成功活检胚胎的94.4%（34/36）。34枚有FISH结果的人类早期胚胎中,其中10枚为正常女性胚胎,14枚为正常男性胚胎,8枚为性染色体嵌合型胚胎。4.共计数间期核或中期相细胞核200个,198个细胞核见杂交信号。结论1.激光法可用于人类胚胎活检。2.荧光原位杂交技术可快速高效’准确地对人类植入前胚胎进行性别诊断,性染色体嵌合型不影响性别诊断的准确性。3.建立了人类植入前胚胎单卵裂球性别诊断的FISH技术平台。

论文目录

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• 中文摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一部分 激光法活检对小鼠体外受精胚胎后期发育的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 第二部分 单卵裂球固定方法的相关研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 第三部分 利用FISH技术对人类早期胚胎进行性别检测
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 附图
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 综述及参考文献