大鼠肺微血管内皮细胞磷酸二酯酶表达与活性及相关清热药影响的研究

论文摘要

肺微血管内皮细胞（PMVEC ）作为气血屏障的主要构成部分,在维持肺的内环境稳定、调节其生理和免疫功能,以及介导呼吸系统疾病的发生、发展和转归等方面发挥着重要的作用。在PMVEC中,cAMP为调节其屏障功能的重要因素。磷酸二酯酶（PDE）作为环核苷酸的唯一水解酶,通过调节细胞内环核苷酸的水平调控机体一系列生理和病理变化。本实验通过检测PDE基因表达和活性,明确PMVEC内PDE同功酶的基因表达类型以及炎症因子（IL-1β、IL-6）和入肺经的相关清热药作用下PDE活性变化,为筛选以PMVEC内PDE为靶点的特异性抑制剂提供依据,并为从分子水平揭示中药归经及其药理作用积累资料,内容如下:采用组织贴块法分离培养PMVEC,经CD31、VIII免疫荧光染色鉴定为PMVEC。以反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测到PMVEC存在PDE1A、1C,2A、3A、3B、4A、4B、4C、4D、5A、7A、7B、8A、8B、9A、10A、11A共17个PDE亚型。高效液相色谱法（HPLC）测定结果显示PMVEC内存在能够分解cAMP/cGMP的高活性PDE,其中特异性水解cAMP的PDE主要为PDE4。HPLC法检测IL-1β、IL-6作用PMVEC后cAMP-PDE活性变化,结果显示:cAMP-PDE活性在30min内与IL-1β、IL-6呈剂量依赖性升高,而后逐渐降低,60min后趋于平衡,但显著高于炎症因子刺激前。采用HPLC法检测17味常用入肺经清热类中药对肺组织内PDE活性的影响,结果显示:黄芩对肺组织cAMP-PDE活性抑制作用最强,抑制率为75.37%,其次黄药子和青蒿,抑制率分别为72%和61.26%,黄芩、黄药子、青蒿对PMVEC内PDE活性的抑制率分别为66.61%、63.54%、59.39%,三味中药对肺与PMVEC抑制率相关性达0.98。以上结果表明:PMVEC中存在多种PDE同功酶基因的表达并具有较高的活性;IL-1β、IL-6能够引起PMVEC中cAMP-PDE活性的异常升高;入肺经的清热类中药尤其是黄芩、黄药子和青蒿对其活性具有较强的抑制作用,提示可以以cAMP-PDE活性为靶点探讨中药归经,并筛选出特异性作用于PMVEC的PDE抑制剂。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 序论
• 1 研究目的和意义
• 2 研究进展
• 3 研究内容与方法
• 第二章 PMVEC 体外培养及鉴定
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 第三章 PMVEC 内PDE 基因表达测定
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 第四章 PMVEC 内PDE 活性检测
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 第五章 IL-1Β、IL-6 对PMVEC 内CAMP-PDE 活性影响
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 第六章 入肺经清热药对PMVEC 内CAMP-PDE 活性影响
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 第七章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介