NKT细胞对C57BL/6小鼠胚胎着床和发育的影响及其免疫机制的初步研究

论文摘要

目的：为了探究NKT细胞对C57BL/6小鼠胚胎着床和发育的影响及其可能的免疫机制,通过刺激NKT细胞增殖活化,观察胚胎着床及发育情况,同时检测其分泌的细胞因子IL-10和TNF-α变化,以分析其在母体子宫内膜免疫微环境中的调节作用。方法：1、在小鼠胚胎着床前后的不同时间腹腔注射不同浓度的抗原KRN7000刺激NKT细胞活化,整体观察胚胎着床和发育情况。2、在小鼠胚胎着床前后的不同时间腹腔注射不同浓度的抗原KRN7000刺激NKT细胞活化,用RT-PCR法半定量检测NKT细胞活化后子宫蜕膜组织中IL-10和TNF-αmRNA的表达量。结果：1、分别给妊娠D3（着床前一天）和妊娠D6（着床后）小鼠腹腔注射不同浓度（0,1.25,2.5,5μg/ml）的抗原KRN7000每只0.4m1,于妊娠D8观察着床胚胎数及其发育情况,结果显示于妊娠D3给药后,各实验组胚胎着床数减少,与对照组相比存在显著差异（P<0.05）,着床后的胚胎发育不良,但不同实验组之间不存在显著差异（P>0.05）。于妊娠D6给药后,各实验组均诱导胚胎流产,胚胎吸收率均达100%。2、分别给妊娠D3和妊娠D6小鼠腹腔注射不同浓度（0,1.25,2.5,5μg/ml）的抗原KRN7000每只0.4m1,用RT-PCR技术检测给药后一天不同实验组子宫蜕膜组织中IL-10的mRNA表达。结果显示妊娠D4（着床日）小鼠中,各实验组子宫蜕膜组织中IL-10的mRNA表达均明显低于对照组,差异有显著性（P<0.05）；而不同实验组间IL-10的mRNA表达差异无显著性（P>0.05）。妊娠D7天小鼠中,各实验组子宫蜕膜组织中IL-10的mRNA表达也明显低于对照组,差异有显著性（P<0.05）；而不同实验组间IL-10的mRNA表达差异无显著性（P>0.05）。3、分别给妊娠D3和妊娠D6小鼠腹腔注射不同浓度（0,1.25,2.5,5μg/ml）的抗原KRN7000每只0.4ml,用RT-PCR技术检测给药后一天不同实验组子宫蜕膜组织中TNF-α的mRNA表达。结果显示妊娠D4,实验组各组中TNF-α的mRNA表达明显低于对照组,差异有显著性（P<0.05）；而不同实验组间TNF-α的mRNA表达差异无显著性（P>0.05）；妊娠D7小鼠中,各实验组TNF-α的mRNA表达高于对照组,但1.25μg/ml和2.5μg/ml浓度组与对照组比较差异有显著性（P<0.05）,而5μg/ml浓度组与与对照组比较差异无显著性（P>0.05）。4、通过分析妊娠D4和妊娠D7小鼠的子宫蜕膜TNF-α/IL-10的相对光密度比值,结果显示在妊娠D4小鼠中各实验组TNF-α/IL-10的相对光密度比值高于对照组,1.25μg/ml和5μg/ml浓度组与对照组比较差异有显著性（P<0.05）,而2.5μg/ml浓度组与对照组比较差异无显著性（P>0.05）,5μg/ml浓度组比值高于其他三组,差异具有显著性（P<0.05）。在妊娠D7小鼠各实验组TNF-α/IL-10的相对光密度比值显著高于对照组（P<0.05）,但各实验组之间无显著性差异（P>0.05）。结论：1、在胚胎着床前激活NKT细胞可使着床胚胎数减少和胚胎发育不良；在着床后激活NKT细胞则可促使胚胎流产。2、着床后子宫蜕膜中TNF-α的过量表达将影响胚胎发育,促使胚胎流产。3、在胚胎着床前后,子宫内膜中活化的NKT细胞使Thl/Th2 （TNF-α/IL-10）的比值向Thl漂移,不利于子宫内膜局部形成免疫耐受的微环境,从而影响胚胎着床和妊娠维持。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 引言
• 第2章 材料和方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 实验动物
• 2.1.2 试剂
• 2.1.2.1 试剂
• 2.1.2.2 引物合成
• 2.1.3 主要仪器
• 2.2 方法
• 2.2.1 动物模型的制备
• 2.2.2 KRN7000对小鼠胚胎着床和发育的影响
• 2.2.3 RT-PCR检测子宫蜕膜中TNF-α和IL-10 mRNA的表达
• 2.2.3.1 实验分组
• 2.2.3.2 提取小鼠子宫蜕膜中总RNA
• 2.2.3.3 RNA逆转录
• 2.2.3.4 PCR扩增
• 2.2.3.5 琼脂糖凝胶电泳及分析
• 2.3 统计学分析
• 第3章 结果
• 3.1 KRN7000对小鼠胚胎着床和发育的影响
• 3.1.1 妊娠D3给药后小鼠的着床胚胎数及胚胎发育情况
• 3.1.2 KRN7000对早孕小鼠胚胎的影响
• 3.2 KRN7000对妊娠D4子宫蜕膜中IL-10和TNF-αmRNA表达的影响
• 3.2.1 KRN7000对妊娠D4子宫蜕膜组织中IL-10 mRNA表达的影响
• 3.2.2 KRN7000对妊娠D4子宫蜕膜组织中TNF-α mRNA表达的影响
• 3.3 KRN7000对妊娠D7子宫蜕膜中IL-10和TNF-α mRNA表达的影响
• 3.3.1 KRN7000对妊娠D7子宫蜕膜组织中IL-10的mRNA表达的影响
• 3.3.2 KRN7000对妊娠D7子宫蜕膜组织中TNF-α的mRNA表达的影响
• 3.4 NKT细胞活化后TNF-α/IL-10比值的变化
• 3.4.1 不同浓度抗原激活NKT细胞后,妊娠D4 TNF-α/IL-10的变化
• 3.4.2 不同浓度抗原激活NKT细胞后,妊娠D7 TNF-α/IL-10的变化
• 第4章 讨论
• 4.1 NKT细胞对胚胎着床的意义
• 4.2 NKT细胞对着床前后子宫蜕膜中IL-10和TNF-α分泌的影响
• 4.3 NKT细胞对小鼠子宫蜕膜中TH1/TH2平衡的影响
• 第5章 结论
• 致谢
• 参考文献
• 攻读学位期间研究成果
• 综述 细胞因子对胚胎着床影响的研究进展
• 参考文献