应用分子标记技术鉴定湖南甜橙变异株系的研究

论文摘要

甜橙是柑橘中重要的一类,大部分甜橙品种均系突变产生。湖南甜橙变异丰富,但是变异材料存在形态描述受环境因素影响大的不足。我们需要寻找不受环境影响的分子标记技术来鉴定湖南甜橙变异株系。本论文研究以22个甜橙（Citrussinensis（L.）Osbeck）变异株系、安江香柚和朱红橘为材料,通过甜橙变异株系的植物学性状观测与果实品质分析,利用SCoT标记结合克隆测序、ITS标记和SRAP标记对其进行种质鉴定。主要研究结果如下：（1）植物学性状分析结果表明,甜橙变异株系在叶片、果实外观与果实内质均存在不同程度的变异。（2）通过均匀设计优化体系试验,获得适用于本试验室的SCoT标记PCR反应体系和扩增程序如下：20μL PCR反应体系：DNA模板80 ng、1×PCR buffer、1.6 mmol/L Mg2+、0.3 mmol/L dNTPs.0.2μmol/L引物、1.6 U TagDNA聚合酶；PCR反应程序：94℃预变性4min；94℃变性1min,50℃退火45s,72℃延伸lmin 35次循环；72℃延伸8min。（3）利用SCoT标记结合克隆测序可以鉴别其中的12份甜橙变异株系；利用ITS标记可以鉴别其中的17份甜橙变异株系；利用143对SRAP引物对供试材料进行分析,无法鉴别甜橙变异株系。研究证实,甜橙的遗传背景高度一致。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略词表
• 第一章 前言
• 1 研究目的与意义
• 2 柑橘品种鉴定方法
• 3 分子标记在柑橘品种鉴定上的应用
• 3.1 RAPD标记
• 3.2 AFLP标记
• 3.3 cpSSR、EST-SSR标记
• 3.4 SSR标记
• 3.5 ISSR标记
• 3.6 SRAP标记
• 3.7 MSAP
• 3.8 基于反转录座子的分子标记
• 3.9 SNP
• 3.10 多种分子标记技术的综合分析
• 4 分子标记的选择
• 4.1 甜橙形态学观测与果实品质分析
• 4.2 SCoT标记技术
• 4.3 ITS标记技术
• 4.4 SRAP标记技术
• 第二章 甜橙的形态学与果实品质分析
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 主要仪器与试剂
• 1.3 甜橙形态学观测
• 1.4 甜橙果实外观观测
• 1.5 果实内质的测定
• 1.5.1 样品处理方法
• 1.5.2 色谱条件
• 2 结果与分析
• 2.1 甜橙形态学观测
• 2.2 果实外观品质
• 2.3 果实内质
• 3 讨论与小结
• 第三章 甜橙的SCoT标记分析
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 主要仪器与试剂
• 1.2.1 主要仪器
• 1.2.2 主要试剂
• 1.3 试验方法
• 1.3.1 DNA的提取与检测
• 1.3.2 引物合成
• 1.3.3 SCoT-PCR反应体系与扩增程序的优化
• 1.3.4 引物筛选
• 1.3.5 PCR产物检测
• 1.3.6 PCR扩增产物的回收、克隆与测序
• 1.3.7 测序结果的分析
• 2 结果与分析
• 2.1 DNA提取结果
• 2.2 均匀设计结果分析
• 2.3 部分引物筛选结果
• 2.4 引物S19扩增结果
• 2.5 SCoT片段测序结果的分析
• 2.6 编码氨基酸的的分析
• 2.7 BLAST结果的分析
• 3 讨论与小结
• 第四章 甜橙的ITS序列分析
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 主要仪器与试剂
• 1.3 试验方法
• 1.3.1 DNA的提取
• 1.3.2 引物合成
• 1.3.3 PCR反应体系
• 1.3.4 PCR扩增产物的纯化、克隆与测序
• 1.3.5 测序结果的分析
• 2 结果与分析
• 2.1 ITS引物扩增结果的分析
• 2.2 ITS片段测序结果的分析
• 2.3 密码子偏性分析
• 3 讨论与小结
• 第五章 甜橙的SRAP分析
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 主要仪器与试剂
• 1.2.1 主要仪器
• 1.2.2 主要试剂
• 1.3 试验方法
• 1.3.1 DNA的提取与检测
• 1.3.2 引物合成
• 1.3.3 SRAP-PCR的反应体系与扩增程序
• 1.3.4 引物筛选
• 1.3.5 PCR产物检测
• 2 结果与分析
• 2.1 引物筛选结果
• 3 讨论与小结
• 总结与展望
• 1 全文总结
• 2 下一步工作
• 参考文献
• 附录
• 附录A SCoT19测序片断
• 附录B ITS测序片断
• 致谢
• 个人简历