三种粮食作物高MT含量的种质资源及外源诱导研究

论文摘要

MT（melatonin,中文译为褪黑素）是一种吲哚类色胺（N-乙酰-5-甲氧基色胺）,最早是从牛的松果体中发现的。褪黑素是一种生物进化保留分子,广泛存在于包括人类在内的动物、植物和原核生物中。MT是目前已知的抗氧化作用最强的内源性自由基清除剂,而且通过食用含有褪黑素的食物,可使其进入动物和人体中,起到清除体内自由基、提高机体免疫功能、延缓衰老和改善睡眠等功效。以玉米（Zea mays L.）、水稻（Oryza sativa L.）、燕麦（Avena sativa L.）作为试验材料,研究内容和目的是:研究探索出一种农作物籽粒中褪黑素的有效分离、提取方法和建立测定作物籽粒中有效成分褪黑素的高效液相色谱法分析方法;分析测定玉米、水稻、燕麦三种作物种间、品种间籽粒中褪黑素含量及其差异;研究在不同种植环境下作物籽粒中褪黑素含量的变化,研究筛选出褪黑素含量高而且稳定的作物种质资源;研究提高玉米籽粒褪黑素含量的外源调控诱导配套技术。主要研究结果如下:1.建立测定作物籽粒中褪黑素的高效液相色谱法-荧光检测（HPLC-FD）分析方法,结果表明,褪黑素在0.011.20 mg/kg浓度范围内,线性关系良好,其标准曲线的回归方程为Y=643436X-2446.1,R2=0.9998,平均回收率达94.11%。所需测定条件:Alltima C18, 4.6mm×250mm不锈钢柱为色谱柱,50mM Na2HPO4 /H 3PO4缓冲液（PH4.5）:甲醇=50:50为流动相,流速为1ml/min,进样量10μL,激发光波长为280nm,发射光波长为348 nm。研究出玉米籽粒中褪黑素分离、提取效率较高的方法,超声功率为800W左右,超声时间30-60min的破碎籽粒处理,可使籽粒细胞中的褪黑素有效成份得到较为充分释放并溶于甲醇溶剂中。2.研究测定132份玉米品种的籽粒、145份水稻品种的糙米和35份燕麦品种的籽粒中褪黑素含量。结果表明,玉米品种平均含量为96.5 ng/g,变幅为0～2034 ng/g,MT最高玉米品种YM056,为2034 ng/g,是玉米平均MT水平的21.08倍;燕麦平均为98.7 ng/g,变幅为0～568 ng/g,含量最高的燕麦品种是OAT07,为568 ng/g,是燕麦平均MT水平的5.75倍;水稻平均为16.0 ng/g,变幅为0～264 ng/g,MT最高水稻品种SD001,为264 ng/g,是水稻平均MT水平的16.5倍。表现出不同作物种间、同一种作物不同品种间MT含量都存在很大的差异。3.分析了小米（Setaria italica）、荞麦（Fagopyrum esculentum）、黄豆（Glycine mdx Merrill）、绿心豆（Glycine max var）、莲子（Nelumro nucifera）等10种杂粮和豆类作物籽粒的褪黑素含量,其中,绿心豆含褪黑素302 ng/g,莲子为67 ng/g、小米为25 ng/g,其它七种作物褪黑素含量都低于20 ng/g。4.水稻糙米种皮颜色与MT含量具有相关性,即红色米的糙米和黑色米的糙米中MT含量显著高于白色米的糙米中的MT含量。测试的红色米和黑色米的糙米品种共22份,其中11份（占50%）糙米品种含有MT,平均含量为134.18 ng/g;测试白色米糙米品种123份,其中14份（占11.34%）白色米糙米品种含有MT,平均含量为60.50 ng/g。5.研究筛选出MT含量高且三年重复种植含量稳定的玉米品种三份:YM115（906.0 ng/g）、YM046（792.0 ng/g）和YM-N01（644.0 ng/g）;水稻品种中MT含量高且在三季种植下含量稳定的有八份:SD001（249.67 ng/g）、SD075（249.33 ng/g）、SD103（190.33 ng/g）、SD093（197.00 ng/g）、SD025（189.33 ng/g）、SD067（170.00 ng/g）、SD125（157.00 ng/g）、SD119（142.67 ng/g）。6.选取经测定含有MT的水稻品种15份分别于早季和晚季种植,结果得出,早、晚季种植的糙米中平均MT含量分别为132.3 ng/g和144.2 ng/g,经显著性比较,晚稻糙米平均MT含量显著高于早稻。7.玉米苗期（六叶一心）进行外源诱导处理,诱导5d后分别取玉米叶片测定MT含量,结果表明,用3号配方（诱导物ID01、浓度为150mg/kg）和4号配方（诱导物ID01、浓度为300mg/kg）,对供试6个玉米品种的诱导效果均较佳,平均提高玉米叶片MT含量分别达50.59%和69.05%。而其它配方诱导效果只对特定的品种有显著效果,如1号配方（诱导物ID01、浓度为5mg/kg）和2号配方（诱导物ID01、浓度为50mg/kg）对玉米品种YM148、YM115和YM139效果显著;5号配方（诱导物ID02、浓度166.7 mg/kg）对玉米品种YM056提高23.08%;6号配方（诱导物ID02、浓度1667 mg/kg）和7号配方（诱导物ID02、浓度10000mg/kg）对玉米品种YM056、YM049和YM115有显著效果,而对其它品种效果并不显著。玉米苗期进行外源诱导处理,成熟时玉米籽粒中MT含量与对照差异均不显著。8.玉米灌浆期进行外源诱导处理,于成熟期时（诱导处理15d后）分别测定玉米籽粒、玉米苞叶和叶片中的MT含量,结果表明:（1）不同配方对玉米籽粒MT含量的影响:7号配方（诱导物ID02,浓度10000 mg/kg）、8号配方（诱导物ID02,浓度25000 mg/kg）、6号配方（诱导物ID02,浓度1667 mg/kg）可使4份玉米品种籽粒平均MT含量分别提高15.43%、10.21%和9.86%;不同配方对不同玉米品种的诱导效果不同,玉米品种YM139用10号配方、11号配方、9号配方、4号配方、3号配方、7号配方、6号配方诱导处理效果显著,分别提高25.20%、24.28%、22.06%、16.48%、13.01%、12.29%、10.74%;YM115用11号配方、10号配方、7号配方诱导后,分别提高12.44%、11.77%和11.08%;YM056用7号配方和6号配方诱导分别提高13.57%和12.05%;YM049用7号配方和6号配方诱导分别提高20.27%和10.75%。（2）不同配方对玉米苞叶MT含量的影响:3号配方（诱导物ID01,浓度150mg/kg）、4号配方（诱导物ID01,浓度300mg/kg）可使玉米苞叶MT平均含量分别提高15.44%和10.70%。其中,3号配方对玉米品种YM115、YM139、YM056和YM049苞叶MT含量分别提高19.89%、17.73%、17.11%和11.28%;2号配方（诱导物ID01,浓度50 mg/kg）使玉米品种YM115和YM139苞叶MT含量分别提高15.94%和13.01%;4号配方使YM056苞叶MT含量提高16.08%;8号配方使YM139苞叶MT含量提高10.33%。（3）不同配方对玉米叶片MT含量的影响:4号配方、3号配方和2号配方均能提高玉米叶片MT含量,平均含量分别提高18.71%、18.48%和9.63%。9.玉米不同器官,MT含量相差很大,含量高低顺序:籽粒>苞叶>叶片>根。其中,籽粒含量大大高于苞叶和叶片,苞叶和叶片含量相差不大,根部MT含量很低,用HPLC检测不到。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 中英文缩写对照
• 第一章 前言
• 1 褪黑素及其研究历程
• 1.1 何为褪黑素
• 1.2 褪黑素的研究历程
• 2 褪黑素合成分泌规律
• 2.1 褪黑素分泌显昼夜节律性
• 2.2 褪黑素分泌显季节性节律
• 2.3 人体褪黑素分泌呈年龄节律性
• 3 褪黑素生理功能作用
• 3.1 褪黑素与睡眠
• 3.2 褪黑素抗氧化剂作用
• 3.3 褪黑素与免疫功能
• 3.4 褪黑素与生殖功能
• 3.5 褪黑素与抗肿瘤
• 3.6 褪黑素与老年性疾病
• 3.7 褪黑素与忧郁症
• 3.8 褪黑素与镇痛作用减轻头痛等症状
• 3.9 褪黑素对消化道疾病的作用
• 3.10 褪黑素对心肌缺血-再灌注损伤有保护作用
• 3.11 褪黑素可促进动物毛皮生长
• 4 褪黑素安全性评价
• 5 褪黑素合成途径
• 5.1 褪黑素生物合成途径
• 5.2 褪黑素人工合成研究
• 6 褪黑素的检测方法
• 7 褪黑素在生物界分布
• 7.1 在动物界分布
• 7.2 在植物界分布
• 8 褪黑素在植物中的功能作用
• 9 本研究的意义
• 第二章 植物种子中褪黑素的提取及检测方法研究
• 1 材料与方法
• 1.1 高效液相色谱法（HPLC）测定玉米种子褪黑素含量研究
• 1.2 超声处理对玉米种子褪黑素成份提取的影响
• 2 结果与分析
• 2.1 高效液相色谱――荧光检测结果
• 2.2 高效液相色谱――紫外检测结果
• 2.3 褪黑素标准曲线与精密度
• 2.4 褪黑素回收率测定
• 2.5 对提取褪黑素成份所用的超声条件进行优化
• 3. 结论与讨论
• 第三章 三种粮食作物褪黑素含量测定及其筛选
• 1.材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 不同品种间玉米种子褪黑素含量差异
• 2.2 水稻糙米褪黑素含量的品种间差异
• 2.3 不同种皮色水稻糙米MT 含量差异分析
• 2.4 燕麦种子褪黑素含量的品种间差异
• 2.5 三种粮食作物褪黑素含量比较分析
• 2.6 其它杂粮、豆类等种子褪黑素含量
• 3. 结论与讨论
• 第四章 不同种植季节和年份对水稻和玉米种子褪黑素含量影响
• 1. 材料与方法
• 1.1 不同种植季节对水稻稻米褪黑素含量的影响探讨
• 1.2 不同种植年份对玉米籽粒褪黑素含量的影响
• 2. 结果分析
• 2.1 水稻在不同生长季节下，糙米褪黑素含量差异分析
• 2.2 水稻品种糙米褪黑素含量稳定性分析
• 2.3 玉米在不同年份种植，籽粒褪黑素含量变化
• 3. 结论与讨论
• 第五章 外源诱导提高玉米褪黑素含量的研究
• 1. 材料与方法
• 1.1 玉米苗期喷施诱导物对玉米叶片和籽粒褪黑素含量影响
• 1.2 玉米灌浆期喷施诱导物对玉米叶片和籽粒褪黑素含量的影响
• 2. 结果与分析
• 2.1 苗期喷施诱导物对玉米叶片褪黑素含量的影响
• 2.2 苗期喷施诱导物对玉米籽粒褪黑素含量的影响
• 2.3 灌浆期喷施诱导物对玉米叶片褪黑素含量的影响
• 2.4 灌浆期喷施诱导物对玉米籽粒褪黑素含量的影响
• 2.5 灌浆期喷施诱导物对玉米苞叶褪黑素含量的影响
• 2.6 玉米各部位褪黑素含量
• 3. 结论与讨论
• 结语
• 参考文献
• 致谢