单细胞凝胶电泳检测洛克沙胂对中国仓鼠肺细胞的DNA损伤

论文摘要

以洛克沙胂为代表的有机胂饲料添加剂具有抗菌、促生长、提高饲料转化率等作用,在畜禽生产中广泛使用。动物机体对洛克沙胂吸收较少,大部分以原型随粪便排泄进入环境。砷是一种公认的致癌物,对细胞DNA有明显的损伤。洛克沙胂毒性虽小,但对DNA的影响及进入环境后对生物的潜在遗传毒性,目前研究报道较少。本文通过单细胞凝胶电泳技术,研究洛克沙胂对中国仓鼠肺细胞的DNA影响,初步探讨洛克沙胂的遗传毒性及对环境生物的潜在风险。单细胞凝胶电泳实验中,试验设计分别为1、10、100、500、1000μg/ml的洛克沙胂以及10μg/ml的亚砷酸钠组,并设空白对照,染毒3、6、12、24、48h后,用改良碱性单细胞凝胶电泳方法,通过CASP软件分析彗星尾部DNA含量、尾力矩、Olive尾力矩三个指标。结果表明,1、10、100、500、1000μg/ml洛克沙胂处理后细胞尾部DNA含量分别从3h的2.02%、4.22%、7.48%、9.60%和11.03%增加到48h的13.87%、15.51%、28.29%、29.39%和35.17%;尾力矩分别从3h的0.12%、0.27%、0.81%、0.95%和1.44%增加到48h的1.84%、3.11%、4.28%、5.06%和7.61%;Olive尾力矩分别从3h的0.27%、0.48%、1.02%、1.23%和1.57%增加到48h的2.06%、2.34%、5.11%、5.58%和8.18%。可以看出,1μg/ml洛克沙胂在暴露12h后可以诱导细胞的DNA损伤(P<0.05);其他洛克沙胂处理组在所有暴露时间内均可引起明显的DNA损伤(P<0.05);500、1000μg/ml洛克沙胂处理引起的细胞损伤与中等浓度的亚砷酸钠相当(P﹥0.05)。洛克沙胂对V79细胞的微核实验表明,除1μg/ml洛克沙胂处理组外,其他洛克沙胂组在暴露12h后均有明显的微核出现率,但对DNA损伤的检出暴露时间长于单细胞凝胶电泳方法。单细胞凝胶电泳实验及微核实验均表明洛克沙胂对V79细胞有DNA损伤作用,且单细胞凝胶电泳技术比微核实验可检测出对细胞的更早期损伤。提示畜禽粪便中洛克沙胂残留进入环境后,可能对环境生物存在着潜在的遗传毒性;单细胞凝胶电泳技术可作为有机胂DNA损伤的有效检测手段。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一部分 文献综述
• 第一章 单细胞凝胶电泳检测细胞 DNA 损伤的研究概况
• 1 细胞的DNA 损伤
• 2 DNA 单/双链断裂的产生及其检测方法
• 2.1 DNA 单/双链断裂的产生
• 2.2 DNA 链断裂检测方法
• 3 彗星实验技术的原理和发展
• 4 彗星实验的应用
• 4.1 各种理化因素诱导的DNA 损伤与修复的研究
• 4.2 作为生物标记进行生物监测及流行病学研究
• 4.3 遗传毒理学研究
• 4.4 肿瘤治疗方面的研究
• 4.5 彗星实验在环境毒理学领域的应用
• 4.6 彗星实验在环境污染监测中的应用
• 4.7 彗星实验在生态和健康风险评价中的应用
• 5 小结
• 第二章 洛克沙胂及其残留的生态毒理研究进展
• 1 理化性质
• 2 洛克沙胂的作用及作用机理
• 3 洛克沙胂在畜牧生产中的应用
• 4 洛克沙胂的毒性及残留
• 4.1 毒性
• 4.2 残留
• 5 洛克沙胂的环境行为
• 5.1 洛克沙胂在环境中的降解和转化
• 5.2 洛克沙胂对环境中生物的潜在危害
• 第二部分 实验部分
• 第一章 SGCE 检测洛克沙胂对 V79 细胞的 DNA 损伤
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 细胞活力的测定
• 2.2 SCGE 检测Rox 对V79 细胞的DNA 损伤
• 3 讨论
• 3.1 有机胂化合物对细胞的 DNA 损伤
• 3.2 彗星实验中评价指标的选择
• 3.3 细胞密度的选择
• 3.4 细胞活力测定试剂盒的选择
• 3.5 彗星实验中应注意的问题
• 4 结论
• 第二章 洛克沙胂对 V79 细胞的微核实验
• 1 材料与方法
• 1.1 细胞系及培养条件
• 1.2 受试物处理
• 1.3 试剂
• 1.4 仪器及设备
• 1.5 方法
• 1.6 统计分析
• 2 结果
• 3 讨论
• 3.1 体外微核实验的原理及优点
• 3.2 微核实验与彗星实验的比较
• 4 结论
• 全文结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文目录