粉防己碱抗内毒素致炎症反应作用及机制研究

粉防己碱抗内毒素致炎症反应作用及机制研究

论文摘要

目的:通过建立LPS致大鼠发热模型和LPS致小鼠疼痛增敏模型,观察粉防己碱(Tetrandrine,Tet)减轻LPS诱导的动物发热和痛觉曾敏作用及其机制;观察Tet对LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型的抗炎作用,并探讨可能的抗炎机制。方法:1.LPS 100μg·kg-1 ip建立大鼠发热模型,连续6小时监测大鼠体温变化,观察Tet相对于对乙酰氨基酚对LPS致大鼠发热的解热作用;运用Westernblotting技术检测肝脏及脑组织中环氧酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)的表达;试剂盒检测肝脏中髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)、血液中前列腺素E2(Prostaglandin E2,PGE2)的含量。2.LPS 100μg·kg-1 ip建立小鼠疼痛增敏模型,分别用热板法和醋酸扭体法观察Tet相对于对乙酰氨基酚对疼痛增敏小鼠的镇痛作用;Westernblotting技术检测小鼠脑组织环氧酶(cyclooxygenase COX)-1、COX-2、COX-3的表达;ELISA试剂盒检测血浆中白细胞介素(interleukin IL)-6、IL-10、α-肿瘤坏死因子(α-tumour necrosis factor,TNF-α)的含量。3.LPSμg·ml-1刺激生长良好的RAW264.7巨噬细胞建立细胞炎症模型。不同剂量Tet干预后,NF-κB P65核转位试剂盒检测P65核转位情况;Westernblotting技术检测细胞COX-2、iNOS的表达;ELISA试剂盒培养液中IL-6、IL-10、TNF-α和EIA试剂盒检测PGE2的含量。结果:1. LPS 100μg·kg-1 ,ip后,大鼠体温升高,最高超过正常2.5℃,并在LPS作用后0.5h、3h、6h左右各出现一个发热峰,与文献报道一致,说明建模成功。对乙酰氨基酚处理组动物体温升高不明显。Tet药物组不同程度降低LPS所致发热反应,大剂量组体温降到正常以下。Westernblotting技术显示模型组肝脏和脑组织中COX-2表达增加,同时肝脏中MPO上调,血液中PGE2升高。Tet药物组动物肝脏及脑组织中COX-2蛋白则被不同程度抑制,同时肝脏中MPO的含量,血液中PGE2的水平也相应降低。2. LPS 100μg·kg-1 ip后,小鼠扭体反应次数明显增加,舔足时间提前,呈现出明显痛觉过敏表现。对乙酰氨基酚组可显著减少扭体反应次数和延长舔足时间。Tet药物组不同程度抑制扭体反应次数,延长热板实验的舔足阈,表现出良好镇痛效应。Westernblotting技术显示模型组脑组织中COX-2、COX-3表达增加,COX-1无变化,血浆IL-6、IL-10、TNF-α上调;Tet不同程度抑制COX-3表达,降低血浆IL-6、TNF-α,增加IL-10含量。3. LPS 1μg·ml-1干预RAW264.7细胞后,激光共聚焦显微镜下观察结果显示,红染的NF-κB P65亚基聚集于细胞核,使胞核红色荧光明显强于胞浆。同时细胞COX-2、iNOS蛋白表达增加,并伴有培养液中IL-6、TNF-α、IL-10、PGE2上调。Tet药物组细胞胞核红染较弱,COX-2、iNOS表达不同程度下调,培养液中炎性细胞因子IL-6、TNF-α、PGE2降低,抗炎细胞因子IL-10增加。结论:本实验结果显示:(1)Tet具有解热作用,其机制可能与其抑制肝脏和脑组织中COX-2的表达,降低肝脏组织MPO的含量,抑制发热介质PGE2的表达有关;(2)Tet具有抗炎镇痛活性,其作用机制可能与其抑制中枢COX-3、血液中IL-6、TNF-α的产生,促进抗炎因子IL-10的表达有关;(3)Tet可以抑制LPS所致的RAW264.7巨噬细胞炎症反应,其抗炎机制与其抑制NF-κB P65核转位,下游炎性蛋白COX-2、iNOS的表达,和炎性细胞因子IL-6、TNF-α、PGE2的产生有关;另外Tet还可促进抗炎细胞因子IL-10的表达,这可能是其发挥抗炎作用的又一原因。

论文目录

  • 符号说明
  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 正文:粉防己碱抗内毒素所致炎症作用及机制研究
  • 前言
  • 参考文献
  • 第一部分:粉防己碱对脂多糖致大鼠发热的解热作用及机制
  • 1. 材料和方法
  • 2. 结果
  • 3. 讨论与结论
  • 4. 参考文献
  • 第二部分:粉防己碱对脂多糖致小鼠的痛觉增敏的影响及机制
  • 1 材料与方法
  • 2 结果
  • 3 讨论与结论
  • 4. 参考文献
  • 第三部分:粉防己碱对脂多糖诱导RAW264.7 细胞炎症反应影响及机制
  • 1 材料和方法
  • 2 结果
  • 3 讨论与结论
  • 4. 参考文献
  • 文献综述
  • 致谢
  • 攻读硕士学位期间发表的论文
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