人B淋巴细胞刺激因子人源化抗体在毕赤酵母中的表达及ELISA试剂盒的研制

论文摘要

B淋巴细胞刺激因子（B cell activating factor belonging Io the TNF famlly,BAFF）是肿瘤坏死因子（TNF）超家族的第十七位成员,有膜结合型和可溶型两种形式。BAFF不仅参与调节B细胞增殖、分化及抗体的产生,而且还参与T细胞的活化和应答过程。BAFF缺乏可导致免疫功能低下;而BAFF过表达则密切参与了同时涉及B、T淋巴细胞功能亢进的系统性红斑狼疮（SLE）、类风湿关节炎（RA）及干燥综合征（SS）等多种自身免疫性疾病的发生和茂展,而且血清中BAFF的水平与这些疾病的严重程度相关;用抗BAFF抗体或其可溶性受体抑制BAFF的功能可缓解相关疾病的症状。因此,BAFF被认为是治疗这些自身免疫性疾病的理想靶标。第一部分:hBAFF全人源性基因工程抗体（scFv-Fc）在毕赤酵母中的表达、纯化和活性分析本研究利用基因重组技术构建了B淋巴细胞刺激因子.（BAFF）抗体基因（scFv-Fc）的真核表达载体pPICZtA-scFv-Fc,并将此表达载体电转入毕赤酵母菌KM71H中。用“yeast blot”方法筛选高表达菌株,优化表达条件后大规模表达。亲和层析方法纯化抗体,每升菌液中得到纯化抗体五十毫克左右。经ELISA、western blowing和流式细胞等实验检测,抗体可以特异性地识别hBAFF。第二部分:hBAFF酶联免疫试剂盒的研制本研究把分泌抗hsBAFF单克隆抗体的杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔,收集腹水;制备抗原免疫兔子,收集血清。亲和层析分别纯化腹水和血清得到单克隆抗体和多克隆抗体。单克隆抗体作为包被抗体,多克隆抗体用生物素标记后作为检测抗体,制成可用于定量检测hBAFF浓度的ELISA试剂盒。该试剂盒的检测范围为1-100ng/ml。试剂盒具有良好的特异性和精确度,可以用于实验室定量细胞因子浓度和临床检测。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 文献综述
• 第一章 B淋巴细胞刺激因子（BAFF）:自身免疫性疾病和淋巴瘤治疗的新靶标
• 第二章 巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白
• 第二部分 实验内容
• 第三章 表达载体的构建及重组毕赤酵母菌的获得
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 第四章 hsBAFF全人源性基因工程抗体（scFv-Fc）在毕赤酵母中的表达、纯化和活性分析
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 第五章 ELISA试剂盒的研制
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 总结
• 参考文献
• 硕士在读期间研究成果
• 致谢