螯合剂对金属-Aβ40/42聚集体解离的促进作用

论文摘要

阿尔茨海默症是最常见的一种老年痴呆症。p淀粉样多肽（Aβ）沉积是阿尔茨海默症的重要病理特征之一。研究发现,Cu2+、Zn2+等离子可诱导Aβ聚集形成不可溶的沉淀,AD的发病中Aβ的沉积发挥着重要作用。本文采用两种荧光螯合剂,系统研究其对金属-Aβ聚集体形成的逆转作用。主要采用荧光光谱、紫外可见光谱、透射电镜、倒置荧光显微镜等对Aβ聚集体的解聚做了研究,并用MTT法测试了Aβ在解聚过程中毒性变化。本论文取得的结果包括：一、用荧光光谱仪测试了两种配体的荧光性质,包括pH、溶剂、各种金属离子对配体荧光的影响,最终选择含10%乙醇的Tris-HCl （pH 7.4）缓冲液作为以后实验的反应体系。两种配体对Cu2+、Zn2+均有响应。二、通过荧光法、BCA法检测配体对聚集体的解聚作用。发现配体可以将聚集体中金属离子夺去,但是聚集体只是一小部分发生解聚。三、透射电镜观察到配体可以使金属离子-Aβ聚合物发生不同程度的解聚。对Aβ40的解聚效果较Aβ42好一些。四、细胞实验证实FC-11可以跨过细胞膜。毒性实验发现FC-11-Cu2+、FC-12-Cu2+具有很强的细胞毒性。另一方面,从CuZ+-Aβ聚集体与配体作用后,对细胞的毒性大大增强,也证实了配体对Cu2+-Aβ聚集体中的Cu2+的螯合作用很强。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 本论文主要创新点
• 第一章 绪论
• 1.1 阿尔茨海默病
• 1.2 Aβ的聚集及其毒性
• 1.2.1 Aβ的产生
• 1.2.2 Aβ的结构及聚集行为
• 1.2.3 Aβ的毒性
• 1.2.4 Aβ级联假说与细胞凋亡
• 1.3 金属离子与Aβ的相互作用及其神经毒性
• 1.3.1 Aβ与过渡金属离子
• 2+与Aβ的作用'>1.3.2 Cu²⁺与Aβ的作用
• 2+与Aβ的作用'>1.3.3 Zn²⁺与Aβ的作用
• 1.3.4 AD的氧化胁迫
• 1.4 AD的螯合治疗
• 1.5 选题依据
• 第二章 配体的各种荧光性质
• 2.1 引言
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 试剂和仪器
• 2.2.2 溶液的配制
• 2.2.3 实验参数
• 2.2.4 各种溶剂对两种配体荧光的影响
• 2.2.5 pH对两种配体荧光的影响
• 2.2.6 各种金属离子对配体荧光的影响
• 2+、Zn²⁺对配体FC-11荧光光谱的影响'>2.2.7 同浓度的Cu²⁺、Zn²⁺对配体FC-11荧光光谱的影响
• 2+对配体FC-12荧光光谱的影响'>2.2.8 不同浓度的Cu²⁺对配体FC-12荧光光谱的影响
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 各种溶剂对FC-11、FC-12的影响
• 2.3.2 pH对两种配体荧光的影响
• 2.3.3 各种金属离子对配体荧光的影响
• 2+、Zn²⁺对配体FC-11荧光光谱的影响'>2.3.4 不同浓度的Cu²⁺、Zn²⁺对配体FC-11荧光光谱的影响
• 2+对配体FC-12荧光光谱的影响'>2.3.5 不同浓度的Cu²⁺对配体FC-12荧光光谱的影响
• 2.4 小结
• 第三章 荧光、BCA法研究Aβ-金属离子复合物的解聚
• 3.1 引言
• 3.2 荧光法测试螯合剂与聚集体的作用
• 3.2.1 试剂和仪器
• 3.2.2 溶液的配制
• 3.2.3 实验原理
• 3.2.4 实验方法
• 3.2.5 结果与讨论
• 3.3 BCA法测定Aβ聚集体的解聚
• 3.3.1 仪器和试剂
• 3.3.2 实验原理
• 3.3.3 实验方法
• 3.3.4 结果和讨论
• 2+的螯合作用'>3.4 荧光和BCA法定量检测配体对聚集体中Cu²⁺的螯合作用
• 3.4.1 实验原理
• 3.4.2 实验方法
• 3.4.3 实验结果与讨论
• 3.5 小结
• 第四章 配体对Aβ聚集体解聚的形态研究
• 4.1 引言
• 4.2 仪器和试剂
• 4.3 实验方法
• 4.4 结果与讨论
• 4.5 小结
• 第五章 细胞跨膜及毒性实验
• 5.1 引言
• 5.2 细胞跨膜实验
• 5.2.1 仪器和试剂
• 5.2.2 溶液配制
• 5.2.3 细胞的培养与跨膜实验
• 5.2.4 结果与讨论
• 5.3 细胞毒性实验
• 5.3.1 实验仪器及试剂
• 5.3.2 溶液的配制
• 5.3.3 MTT法原理
• 5.3.4 聚集体的培养
• 5.3.5 细胞的培养及毒性测试
• 5.3.6 结果与讨论
• 5.4 小结
• 结论与展望
• 参考文献
• 攻读硕士期间发表的论文
• 致谢