血管内皮生长因子基因多态性与2型糖尿病视网膜病变的关联性研究

论文摘要

目的:糖尿病（diabetes mellitus,DM）是一组以慢性血葡萄糖（简称血糖）水平增高为特征的代谢疾病群。它可引起多系统的损害导致组织器官功能缺陷甚至衰竭。糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy,DR）是糖尿病微血管病变中的重要表现,属于糖尿病的严重并发症之一。据文献报道,DR是美国等发达国家4项主要致盲疾患之一。在我国,随着经济发展和生活水平的提高,糖尿病的患病率已达到3.2%,相应地DR也成为近十年我国发病率急剧升高的主要疾患。DR的发病机制目前尚未完全阐明,一些研究表明DR是一种多因素协同作用的糖尿病微血管并发症,长期慢性的高血糖导致的一系列代谢异常与DR的发生有关,但是DR的发病时间和严重程度并不能完全由生理生化和环境因素来解释,一部分患者DR与DM的发病几乎是同时的,而有的患者却在DM发病十年或几十年后才发生DR,甚至至病逝也不曾发生;严格控制血糖可以延缓和减轻某些糖尿病患者DR的发展,但不能彻底阻止其发生,而某些血糖控制不良的糖尿病患者却并不发生DR;同时DR具有家族聚集倾向,不同种族不同地域的糖尿病人群DR的发病率也是不同的。由此可见,遗传因素在DR的发生、进展过程中起着不可忽视的作用。目前国内外的学者主要从DR发生和进展的病理生理基础着手,筛选出可能有影响作用的候选基因,从基因多态性及基因表达调控方面分析DR的遗传易感性。在欧洲白种人群、亚洲日本人群及印度人群中,这方面的研究较多,取得了一定进展,但是尚未有统一明确的结论。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）可特异作用于血管内皮细胞,增加血管通透性及新血管形成,对DR尤其是增生性糖尿病视网膜病变（proliferation diabetic retinopathy,PDR）的发生起着重要作用。VEGF基因上的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）可能影响其基因的转录水平和蛋白的表达水平,因而可能与疾病的发生有关。有关VEGF基因多态性与DR发病风险的相关研究,国外如欧洲日本已对部分基因位点作了报道,但是结论尚有分歧。此外由于遗传存在种族差异,故开展大范围多种族的研究对全面深入揭示DR遗传易感因素而言是必要的。本研究旨在探讨VEGF基因启动子区-2578C/A多态性及3’-非翻译区（ 3’-untranslatedregion,3’-UTR）+936C/T多态性与中国北方汉族人群2型糖尿病视网膜病变的关系。方法:本研究采用病例-对照研究方法,病例来源于2006年3月至2007年12月在河北医科大学第四医院眼科及内分泌科住院、以及在石家庄市区和周围县村进行DR筛查时发现的糖尿病患者,其中仅患有糖尿病无DR的患者（DM组）144例,糖尿病视网膜病患者（DR组）141例,DR组中包括105例非增殖性糖尿病视网膜患者（NPDR组）、36例增殖性糖尿病视网膜病变患者（PDR组）,所有病例均经国际WHO糖尿病诊断标准及国际糖尿病视网膜病变分型标准确诊。137例健康对照（Control组）来自同期在河北医科大学第四医院进行健康体检的无关个体。均采集外周静脉血4ml,蛋白酶K消化-饱和氯化钠盐析法提取外周血白细胞DNA。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP）分析方法检测VEGF的基因型及等位基因分布频率。数据统计分析采用SPSS13.0版软件包（SPSS Company, Chicago, Illinois, USA）进行,P<0.05认为有统计学意义,卡方分割法以P<α’=0.0125认为有统计学意义。比较各位点基因型频率的观察值与预期值并进行卡方检验行Hardy-Weinberg平衡分析。连锁不平衡分析采用2LD软件（1.2 version,Rockefeller University,New York）进行。病例组与对照组的基因型和等位基因频率分布比较采用行×列表χ2检验。以非条件Logistic回归法计算相对风险度的比值比（odds ratio,OR）及其95%可信区间（confidence interval,CI）。结果:1.对照组VEGF两个多态位点的基因型频率分布符合Hardy-weinberg平衡（P﹥0.05）。2. VEGF基因启动子区-2578C/A多态性与糖尿病视网膜病变的关系:Control、DM、DR三组C、A等位基因频率分别为74.8%、25.2%;75%、25%;83.7%、16.3%,DR组的C等位基因频率明显高于其他两组,三组相比差异有统计学意义（χ2=8.390,P=0.015）。三组两两比较结果,Control组与DM组相比差异无统计学意义（χ2=0.002,P>0.0125）;Control组与DR组相比差异有统计学意义（χ2=6.665,P<0.0125）;DM组与DR组相比差异有统计学意义（χ2=6.551,P<0.0125）。三组C/C、C/A、A/A基因型频率分别为57.7%、34.7%、8%;55.6%、38.9%、5.6%;69.5%、28.4%、2.1%,三组相比也差异有统计学意义（χ2=9.653,P=0.047）。三组两两比较结果Control组与DM组相比差异无统计学意义（χ2=1.093,P>0.0125）;Control组与DR组相比差异有统计学意义（χ2=7.118,P<0.0125）;DM组与DR组相比差异也有统计学意义（χ2=6.729,P<0.0125）。与C/A+A/A基因型相比,C/C基因型可能明显增加糖尿病视网膜病变的发病风险,Control组与DR组相比经年龄、性别、空腹血糖、收缩压、舒张压、体重指数及糖尿病病程校正的OR=1.673（95%CI=1.0222.740）;DM组与DR组相比经校正的OR=1.823（95%CI=1.1212.965）。3. VEGF基因3’-UTR+936C/T多态性与糖尿病视网膜病变的关系:Control、DM、DR三组C、T等位基因频率分别为86.4%、15.6%;83.7%、16.3%;83.7%、16.3%。三组相比差异无统计学意义（χ2=1.123,P=0.570）。三组C/C、C/T、T/T基因型频率分别为75.9%、21.2%、2.9%;70.1%、27.1%、2.8%;68.8%、29.8%、1.4%。三组相比差异也无统计学意义（χ2=1.948,P=0.378）。与C/T+T/T基因型,C/C基因型不增加糖尿病视网膜患者的发病风险,Control组与DR组相比经校正的OR=1.430（95%CI=0.8422.427 ）; DM组与DR组相比经校正的OR=1.065（95%CI=0.6431.764）。4.以国际糖尿病视网膜病变分型作为分层标准:NPDR组VEGF-2578C/A位点C/C、C/A、A/A基因型频率分别为72.4%、26.7%、1%,与PDR组（61.1%、33.3%、5.6%）相比差异没有统计学意义（χ2=1.606,P=0.205）。携带C/C基因型的个体不比携带C/A+A/A基因型的个体发生增殖性视网膜病变的风险高,经校正的OR=0.600（95%CI=0.2711.328）。两组C、A等位基因频率分别为85.7%、14.3%;77.8%、22.2%,相比差异也无统计学意义（χ2=2.474,P=0.116）。同样NPDR组VEGF+936C/T位点C/C、C/T、T/T基因型频率分别为67.6%、31.4%、1%,与PDR组（72.2%、25%、2.8%）相比差异没有统计学意义（χ2=0.265,P=0.607）。携带C/C基因型的个体不比携带C/T+T/T基因型的个体发生增殖性视网膜病变的风险高,经校正的OR值为0.803（95%CI=0.3481.853）。两组C、T等位基因频率分别为83.3%、16.7%;84.7%、15.3%,相比差异也无统计学意义（χ2=0.676,P=0.783）。结论:1.在中国北方汉族人群中VEGF基因启动子区-2578C/A多态性可能与2型糖尿病视网膜病变的发病风险有关。与C/A+A/A基因型相比,携带C/C基因型可能增加糖尿病视网膜病变的发病风险,糖尿病患者中携带C/C基因型的患者发生DR的可能性是其他基因型的1.823倍。2.在中国北方汉族人群中VEGF基因3’-UTR+936C/T多态性可能与2型糖尿病视网膜病变的发病风险无关。3.在中国北方汉族人群中VEGF基因启动子区-2578C/A及3’-UTR+936C/T多态性可能与2型糖尿病视网膜病变由非增殖期进展到增殖期的发生风险无关联性。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 血管内皮生长因子基因多态性与2 型糖尿病视网膜病变的关联性研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 血管内皮生长因子基因多态性与疾病的关联性研究进展
• 致谢
• 个人简历