论文摘要
目的:探讨NADPH氧化酶抑制剂Apocynin对兔离体颈静脉内皮细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制。方法:健康新西兰大白兔18只,随机分为实验组(n=9)和对照组(n=9)。实验组每天取NADPH氧化酶抑制剂Apocynin 15 mg,用水稀释至10 ml灌胃;对照组每天给予同样体积的水灌胃。连续给药2周后取双侧颈内静脉,离体后置于肝素化全血37℃保存90 min后固定,通过离体缺血过程获得氧化应激损伤的兔颈静脉。采用免疫荧光染色观察石蜡切片中NADPH氧化酶p47phox蛋白在血管各层的分布,采用western blotting对离体血管组织中NADPH氧化酶p47phox蛋白进行定量分析,观察Apocynin对NADPH氧化酶的影响。采用TBA法测量离体血管组织中脂质过氧化产物MDA含量,结合电镜观察明确内皮细胞损伤情况。结果:通过免疫荧光染色观察可见NADPH氧化酶呈现绿色荧光,血管内皮细胞层分布较多,实验组内皮细胞中呈现淡绿色荧光,对照组内皮细胞中呈现亮绿色荧光,提示实验组内皮细胞内NADPH氧化酶表达受抑;通过western blotting分析NADPH氧化酶p47phox蛋白表达,实验组为124.23±6.94,较对照组137.17±15.91明显减少(p﹤0.05);通过TBA法测定氧化应激过程中的脂质过氧化产物MDA,实验组MDA浓度为1.98±0.35,较对照组2.13±0.16降低(p﹤0.001),提示实验组较对照组氧化应激损伤减轻;通过电镜观察发现实验组与对照组内皮细胞都有不同程度的超微结构损伤,实验组内皮细胞损伤程度明显减轻,各组归入不同损伤等级细胞的数量与是否使用Apocynin有极显著的相关(p﹤0.001),提示Apocynin对内皮细胞损伤有保护作用。结论:Apocynin抑制了兔离体颈静脉内皮细胞NADPH氧化酶p47phox蛋白的表达,减轻了内皮细胞氧化应激损伤的程度,能有效保护离体静脉。其机制可能与Apocynin抑制NADPH氧化酶,使内皮细胞内活性氧生成减少,减轻氧化应激损伤有关。
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- [1].探究阿魏酰低聚糖对氧化应激损伤的保护作用机制[J]. 中国食品 2020(10)