HBsAg真核表达载体的构建及在CHO细胞高效表达的研究

论文摘要

以pCI和pCIneo为起始质粒,通过改造目的基因及表达载体,对CHO细胞系统高效表达乙肝表面抗原进行了初步探索。结果显示,通过更换启动子、引入内含子、去除目的基因的5′和3′非翻译区、弱化抗性标记基因、改造目的基因中的稀有密码子等方法,成功构建了乙型肝炎病毒表面抗原S基因的新型表达载体。将构建的表达载体分别转染到CHO/dhfr-细胞中,均表达出了乙型肝炎表面抗原（HBsAg）,经三轮梯度加压筛选获得抗性细胞群。单层培养分泌动态研究表明其HBsAg表达量稳定在512～1024/两天,比原有生产细胞株HBsAg表达量提高近2倍,为提高基因工程乙肝疫苗的产量奠定了实验基础。

论文目录

• 内容提要
• 第一章 绪论
• 一、病毒性肝炎
• 二、乙型肝炎
• 三、乙型肝炎病毒
• 四、乙型肝炎的治疗与预防
• 五、乙型肝炎疫苗的研究进展
• 六、基因工程乙肝疫苗的表达系统
• 七、CHO 细胞系统高效表达外源基因的研究进展
• 八、本论文选题依据和可行性分析
• 第二章 乙肝表面抗原（HBsAg）S 基因的克隆及基因突变
• 一、材料与方法
• 二、结果
• 三、讨论
• 四、结论
• 第三章 表达载体的构建
• 一、材料与方法
• 二、结果
• 三、讨论
• 四、结论
• 第四章 重组CHO 高产细胞株的构建及筛选
• 一、材料与方法
• 二、结果
• 三、讨论
• 四、结论
• 参考文献
• 攻读博士期间发表的学术论文
• 中文摘要
• 英文摘要
• 附录
• 致谢