论文摘要
目的进一步探讨MK801对大鼠脑海马CA1区缺血再灌注损伤后不同时间段内凋亡相关基因Bcl-2、Bax和C-fos表达的情况及其对神经元凋亡产生的影响,为临床上治疗脑缺血缺氧性疾病提供充分的实验依据。方法将212只雄性SD大鼠按随机列表的方法随机分为三组:正常对照组;模型组;用药组。①正常对照组,共64只,正常饲养,分别取32只通过HE染色法、免疫组化法与Western-blot法观察海马CA1区Bcl-2、Bax、C-fos基因的表达情况;②模型组与用药组各74只,分别取64只进行脑缺血再灌注模型的制作,用药组在脑缺血2h后经腹腔注射MK801（0.5mg/Kg）,并且在再灌注后2h、6h、24h、48h后处死取大脑,留取脑缺血再灌注侧海马组织标本,采用HE染色法观察海马CA1区神经元细胞的镜下形态及染色等方面的变化;免疫组化法观察海马CA1区Bcl-2、Bax、C-fos基因的表达情况;Western-blot法观察海马CA1区Bcl-2、Bax、C-fos基因蛋白表达的情况。另外模型组与用药组各取10只大鼠分别于再灌后6h及48h行脑梗死体积的计算。结果模型组、用药组与正常对照组比较,在不同时间点内海马CA1区Bax、C-fos基因的表达均增高,差异具有统计学意义（P<0.05）,Bcl-2基因在表达的不同时间点内均呈现下降趋势,差异具有统计学意义（P<0.05）。用药组与模型组比较,相应的再灌注后不同时间间隔内Bax、C-fos基因的表达均降低,差异具有统计学意义（P<0.05）,Bcl-2基因的表达在相应时间点内均升高,经统计学分析后差异具有统计学意义（P<0.05）。脑缺血再灌后用药组脑梗死体积较模型组明显减小,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论MK801可通过抑制兴奋性氨基酸受体的激活,减少兴奋性氨基酸的释放,进而降低兴奋性氨基酸的毒性,可通过此途径抑制脑缺血再灌注后神经元细胞的凋亡,对神经元具有较好的保护作用。MK801可以通过促进Bcl-2蛋白的表达,抑制Bax蛋白的表达,提高两者的比例,同时又可以抑制C-fos蛋白的表达,从而达到抑制神经元凋亡的目的。根据免疫组化法与Western-blot法观察神经元凋亡情况可得出:脑缺血再灌后2h即有神经元凋亡,随着时间推移至再灌注后6h达一高峰,至再灌注24h神经元凋亡水平稍降,至再灌注48h后又达到到神经元损伤的高峰,缺血再灌后6h与48h神经元凋亡较2h与24h严重。因此脑缺血再灌注损伤后6h与48h为神经元损伤的高峰期,神经元凋亡较其它时间点为重。为临床上治疗缺血缺氧性脑病提供了较好的时间窗参考.