论文摘要
续断（Dipsaci R.adix）为川续断科植物川续断Dipsacus asper Wall的干燥根,是一味传统中药,具有补肝肾,强筋骨,续折伤,止崩漏的功效,临床上常用于治疗骨质疏松、腰腿酸软、骨折、流产等疾病。近年来需求量不断增长,主产区由四川逐渐向云南、贵州等地转移,各地也开始栽培。川续断为多年生草本,因野生资源过度采挖,栽培规模尚小,市场上药材根条渐细,品质下降。为了更为深入地探讨续断的质量评价方法,并为合理的利用资源提供依据,本论文通过化学、药理和分析三个方面研究工作的有机结合,系统研究了续断的化学成分、主要成分的含量与地理分布特点,通过数据统计分析揭示该药材质量的控制的关键指标及影响药材质量的主要生态因子。并运用化学分类学原理对川续断属其它物种进行了分类学探讨,揭示主要次生代谢产物在属内不同种植物中的分布特点。论文对续断进行了较系统的化学成分研究。综合采用大孔树脂、硅胶、反相硅胶、凝胶等多种吸附材料,通过常压柱层析、中压柱层析及高压液相制备技术等多种分离方法,从续断中共分离得到19个化合物。综合运用多种波[谱学技术鉴定了其中15个化学成分,其中三萜皂苷类成分8个,分别是HNsaponin F（1）、川续断皂苷Ⅵ（2）、灰毛忍冬皂苷甲（3）、川续断皂苷J（4）、川续断皂苷Ⅻ（5）、川续断皂苷X（6）、3-O-β-D-xylopyranosyl（）-β-D-glucopyranosyl一（1→4）]-[α-L-rhamnopyranosyl（1→3）]-β-D-glucopyranosyl（1→3）-(α-L-rhamnopyranosyl-（1→2）-α-L arabinopyranosyl-hederagenin-28-O-β-D-glucopyranoside（7）、川续断皂苷K（8）；环烯醚萜苷类成分7个,分别是当药苷（10）、续断苷J（11）、续断苷K（12）、续断苷L（13）、续断苷B（14）、续断苷A（15）、马钱苷酸（19）。其中4、8、11、12和13是新化合物,并且续断苷L是首次在川续断中发现的三聚体环烯醚萜苷。对皂苷类化合物的活性进行了初步研究,化合物（2,3,5-8）在浓度为4μM时均可显著提高ALP活性,化合物5和6在浓度为4μM时可显著的促进类成骨细胞UMR106细胞增殖,显示川续断皂苷具潜在的抗骨质疏松的活性。另外,抗肿瘤活性筛选结果显示8个皂苷对A375, BGC823, MCF7, SW1990和HEPG2细胞株均没有明显的细胞毒作用。在上述化学成分研究的基础上,首次采用亲水作用（HILIC）色谱柱建立了同时测定多种续断皂苷的HPLC-UV方法,建立了续断中最主要的三个皂苷川续断皂苷Ⅵ（2）、川续断皂苷Ⅻ（5）和川续断皂苷Ⅹ（6）的含量测定方法。首次建立了续断同时测定6种环烯醚萜苷类和2种酚酸类成分含量的HPLC-DAD方法,这8个成分分别是马钱苷酸（19）、马钱苷、当药苷（10）、续断苷L（13）、续断苷B（14）、续断苷A（15）、绿原酸和未知酚酸xud-18（18）。对供试品溶液制备的条件、液相色谱柱、流动相种类和比例等条件进行了详细地探讨。野外采集全国不同产区样品34份,收集药材市场及产地收购商的样品26份,采用上述方法对主根进行含量测定和分析；收集不同商品等级、不同部位如须根、芦头、残茎等的样品共15份,分别进行上述含量测定；对4份新鲜样品进行模拟“发汗”实验,比较发汗与自然晾晒两种干燥方式对药材质量的影响。从各种成分的含量,以及运用主成分分析等统计方法分析,认为三种川续断皂苷（川续断皂苷Ⅵ、Ⅻ、Ⅹ）和马钱苷酸含量是评价药材质量的最重要指标,续断苷A和绿原酸也是值得关注的指标。以三萜皂苷类成分为指标,滇西北的续断质量最好,四川西南次之,鄂西、贵州较差；但以环烯醚萜苷类成分为指标时,总含量从高到低依次是贵州、川西南、鄂西、滇西北；酚酸类成分在贵州产的续断中含量远高于全国其它地区。不同省区续断所含化合物组成比例不同,各有特点：滇西北川续断皂苷Ⅵ的含量非常高；川西南川续断皂苷X含量高：鄂西川续断皂苷Ⅵ含量低,但续断苷A含量高；贵州省川续断皂苷Ⅵ含量很低,但绿原酸、续断苷A和马钱苷含量高。采用多元线性回归方法分析生态因子与各成分含量的关系。结果显示影响续断药材质量的最主要生态因子是海拔,海拔越高总皂苷和总环烯醚萜营的含量越高,质量越好；其次是日照和年降水量,日照与川续断皂苷Ⅵ含量正相关,年降水量与总环烯醚萜苷含量呈正相关关系。此外,皂苷的含量与物种本身遗传因素也有一定关系。皂营类成分主要分布在续断根的皮部,环烯醚萜苷类则主要分布在木质部。同一份样品中粗根比细根皂苷类成分含量低,但环烯醚萜苷类和酚酸类成分含量高。芦头和残茎所含各种化学成分均远低于主根,加工过程中应去除。支根和须根的环烯醚萜苷类成分含量低,但皂苷类成分含量高,在生产上可以加以利用。发汗前后受糖苷酶活性的影响,续断中各种苷化成分（皂苷类和环烯醚帖苷类）的含量发生了很大的变化,但规律尚不清楚。通过野外采集,收集到川续断属6种植物：川续断、日本续断、大头续断、玉龙续断、丽江续断。本文测定了11个成分在这些种类中的含量,得出结论如下：川续断属植物以含有多种结构的环烯醚萜苷类化合物为特征,不仅有简单环烯醚萜苷如马钱苷酸、马钱苷、当药苷,还含有多聚体如续断苷A、B等；而皂苷类成分的含量和比例,可做为属下各种的特征：日本续断和大头续断总皂苷含量低,以川续断皂苷Ⅻ为主,并且日本续断不含皂苷Ⅵ和X；川续断中总皂苷含量较高,以皂苷Ⅵ和Ⅹ为主,皂苷Ⅻ在总皂苷中所占比例最低。玉龙续断和康定续断的化学组成与川续断相似,支持并入川续断。