HSL基因敲除小鼠睾丸双向电泳谱图的初探

论文摘要

经研究发现,敲除了激素敏感脂肪酶会造成雄性小鼠不育。激素敏感脂肪酶Hormone-sensitive lipase（H S L）是动物体脂肪分解的关键酶,它能水解甘油三酯成甘油和脂肪酸以满足动物体的需要。激素敏感脂肪酶对于生殖系统也是非常关键的,敲除激素敏感脂肪酶的小鼠精子发生不正常,睾丸重量下降、精子减少、精子发生过程存在严重缺陷,导致雄性小鼠不育。但是进一步的机制研究包括其相关蛋白质表达方面的研究比较少。基因组学和蛋白质组学的兴起大大促进了从分子水平阐明生命现象及其相关的生理和病理过程。要对参与这些过程有关的基因功能和其调控机制研究清楚,不但要从核酸水平进行研究,更重要的是必须从蛋白质水平进行研究,蛋白质组技术正是进行这方面研究工作的有力工具。本题的意义一是初步探索激素敏感脂酶敲除小鼠不育的机制,对于这种可能用于雄性避孕研究的模型进行初步的研究。二是在前人的基础上,进一步探索蛋白质组学方法在生殖生物学中应用的的一些技术问题。本题的目标是应用蛋白质组学的方法比较雄性激素敏感脂酶敲除小鼠与正常小鼠睾丸中表达水平起变化的蛋白质,从而初步研究激素敏感脂肪酶造成雄性小鼠不育的机制。本试验选取近交系,并且是同一窝的两种基因型的小鼠各3-5只。利用双向电泳的技术来分离睾丸中的蛋白质组分,得到两组不同基因型的小鼠的谱图,通过分析软件对比激素敏感脂肪酶（H S L）缺陷小鼠与正常小鼠在蛋白质水平上的区别,发现两者间存在着一些差异表达的蛋白质。为进一步研究激素敏感脂肪酶敲除造成的不育的机理打下了基础。在本实验中运用了不同的方法来分离睾丸组织的蛋白质,并讨论了在本实验的条件下相对有利于蛋白质分离的方法的原因。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一部分 文献综述及本题意义
• 一 激素敏感脂肪酶（HSL）的背景资料
• 1. 概述
• 2. 不同组织中的HSL
• 二、蛋白质组学的背景资料
• 1 蛋白质组学技术
• 2 蛋白质组学研究技术在生殖医学研究领域的应用
• 3 蛋白质组学研究技术在生殖病理学中的应用
• 4 男性生殖相关蛋白质组学研究展望
• 5 网上和小鼠睾丸蛋白质组相关的数据库
• 三 本论文的内容和研究意义
• 1. 本题的意义主要有以下几个方面:
• 2. 本课题的主要内容
• 第二部分 实验材料和方法
• 一、实验材料
• 1、实验动物
• 2、实验试剂
• 3、实验仪器
• 二、实验方法
• 1 同窝HSL+/+、-/-雄鼠的的繁育
• 2 HSL小鼠基因型的鉴定
• 3 小鼠睾丸组织的蛋白样品提取
• 4 运用Bradford法测定蛋白质含量
• 5 2-DE分离睾丸总蛋白
• 6 凝胶扫描和图像分析
• 第三部分 结果和分析
• 一、HSL小鼠基因型的鉴定
• 二、小鼠睾丸组织蛋白质提取的不同方法的比较
• 三、2-DE技术分离小鼠睾丸总蛋白
• 四、软件分析
• 第四部分 讨论和结论
• 一、HSL小鼠的取材
• 二、双向电泳技术讨论
• 三、HSL敲除可能影响的蛋白质
• 四、展望
• 参考文献
• 缩写词一览表
• 致谢