治疗奶牛真菌性乳腺炎中药方剂的筛选及临床应用

论文摘要

近年来,随着奶牛生活环境的变化及抗生素、皮质激素和免疫抑制剂的广泛使用,奶牛真菌性乳房炎发病率呈明显的上升趋势,逐步引起了养牛业的高度重视。对泰安及周边地区多个奶牛场的临床型乳房炎奶牛乳汁经行病原菌进行分离、鉴定,从80份样品中分离出103株细菌,经培养特性、染色镜检、生化鉴定等试验,鉴定出无乳链球菌54株,占分离菌的52.42%,大肠杆菌20株,占分离菌的19.41%,金黄色葡萄球菌18株,占分离菌的17.47%,真菌12株,占分离菌的11.65%。本试验通过24种中草药对4种真菌进行体外抑菌试验,结果显示黄连、蛇床子、大蒜等对试验真菌具有强大的抑制作用,并根据中药组方原理拟定5个中药方剂,经琼脂扩散抑菌试验最终确定最佳方剂,命名为“乳炎消”灌注剂。应用测定抑菌圈的琼脂平板扩散法和测定最小抑菌浓度(MIC)的药物固体培养基法来评价“乳炎消”灌注剂的体外抗菌活性,结果表明“乳炎消”灌注剂2对分离得到的真菌菌株及标准株均有较好的抑菌作用,其中0.1g/mL的原药液对白色念珠菌、热带假丝酵母菌和临床真菌分离株表现了强大的抑制作用(MIC值达0.0015g/mL),抑菌圈直径分别高达30mm、27mm和25mm。同时对大肠杆菌及金葡萄球菌也有一定的抑制作用。由此证明,中药“乳炎消”灌注液对奶牛乳房炎主要真菌致病菌有较强的抑杀作用;药物浓度与抑菌效应呈正相关。通过过敏反应试验、溶血性试验、热源检测试验及刺激性试验对“乳炎消”的安全性进行检测,检测结果表明乳炎消是无致敏性、无刺激性、无毒的理想外用制剂,有很好的开发应用前景。选择产奶量相近的泌乳期奶山羊18只,随机分为6组,分别对Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组奶山羊的左侧乳室接入白色念珠菌,人工感染,制造乳房炎模型,然后用不同浓度“乳炎消”对前4组进行乳房灌注治疗,第Ⅴ组不进行治疗做阳性对照,第Ⅵ组接入等量生理盐水做阴性对照。对奶山羊体温,产奶量,乳清中酶含量进行分析。结果表明:0.025g/ml生药浓度的“乳炎消”对患病奶山羊具有很好的治疗作用;乳清中SA、ALT的含量在治疗后显著低于治疗前(P<0.05),达到接菌前水平;乳清中LDH的含量也在治疗后低于治疗前,但差异不显著(P>0.05)。对泰安周边地区某牛厂奶牛乳房炎反复发病,经病原菌的分离鉴定为真菌性乳房炎的奶牛10头应用“乳炎消”对其治疗,结果9只在用药后3天肿胀明显减轻,产奶量开始恢复,用药五天后乳腺恢复正常,产奶量恢复到病前水平,治愈率达到90%。

论文目录

• 英文缩略词表
• 中文摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 奶牛乳房炎的危害
• 1.2 乳房炎的发病情况
• 1.2.1 隐性乳房炎的发病情况
• 1.2.2 真菌性乳房炎的发病情况
• 1.3 奶牛乳房炎的病因
• 1.3.1 病原微生物
• 1.3.2 饲养管理因素
• 1.3.3 环境因素
• 1.3.4 遗传因素
• 1.3.5 奶牛真菌性乳腺炎的发病机制
• 1.4 乳房炎的临床症状
• 1.4.1 乳房炎的分类
• 1.4.2 真菌性乳房炎的症状及特点
• 1.5 奶牛乳房炎的诊断
• 1.5.1 临床型乳房炎的诊断
• 1.5.2 隐性乳房炎的诊断
• 1.5.3 奶牛真菌性乳腺炎的诊断措施
• 1.6 奶牛乳房炎的预防
• 1.6.1 搞好环境卫生
• 1.6.2 制定正确的挤奶程序
• 1.6.3 基因工程法
• 1.6.4 乳房炎的疫苗预防法
• 1.6.5 乳头药浴法
• 1.6.6 干奶期预防
• 1.6.7 育种
• 1.7 奶牛乳房炎的治疗
• 1.7.1 乳房炎的抗生素疗法
• 1.7.2 奶牛乳房炎的中药治疗
• 1.7.3 其它疗法
• 1.8 中药治疗奶牛乳腺炎研究进展
• 1.8.1 乳腺炎的中医辨证论治
• 1.8.2 中药治疗奶牛乳腺炎的特点
• 1.8.3 “乳炎消”方剂中各单味中药的分析
• 1.8.4 中草药防治乳房炎存在的问题
• 1.8.5 中草药防治乳房炎的前景
• 1.9 乳汁中LDH、ALT、SA 含量与乳房炎的关系
• 1.10 乳腺上皮细胞的培养
• 1.10.1 乳腺上皮细胞培养的综述
• 1.10.2 乳腺细胞培养方法的研究进展
• 1.10.3 乳腺细胞原代培养研究概况
• 1.10.4 乳腺上皮细胞生长的调控因素
• 1.11 研究的目的和意义
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 仪器设备
• 2.1.2 药品与试剂
• 2.1.3 主要培养基
• 2.1.4 试验动物
• 2.2 方法
• 2.2.1 奶牛乳腺炎病原菌的分离鉴定
• 2.2.2 单味中药体外抑菌实验
• 2.2.3 复方制剂体外抑菌实验的研究
• 2.2.4 中药“乳炎消”方剂安全性检测
• 2.2.5 中药“乳炎消”灌注液对人工诱发奶山羊真菌性乳房炎临床疗效的研究
• 2.2.6 “乳炎消”对临床奶牛乳房炎的治疗试验
• 2.2.7 鼠尾胶原的制备及使用
• 2.2.8 奶牛乳腺上皮细胞（CMEC）培养
• 3 结果与分析
• 3.1 奶牛乳腺炎主要病原菌的分离鉴定结果
• 3.1.1 分离纯化及染色特性
• 3.1.2 生化反应试验
• 3.2 单味中药抑菌试验结果
• 3.2.1 单味中药对白色念珠菌的抑菌试验结果
• 3.2.2 单味中药对热带假丝酵母的抑菌试验结果
• 3.2.3 单味中药对克柔氏念珠菌的抑菌试验结果
• 3.2.4 单味中药对新型隐球菌的抑菌试验结果
• 3.3.复方中药的抑菌作用
• 3.3.1 5 个中药组方对各种真菌的抑菌作用
• 3.3.2 “乳炎消”不同浓度对乳房炎主要致病真菌的抑菌作用
• 3.3.3 药基法测定“乳炎消”不同浓度对乳房炎主要致病菌真菌的抑制作用
• 3.4 “乳炎消”安全性的检测结果
• 3.4.1 过敏反应检查结果
• 3.4.2 溶血试验结果
• 3.4.3 热源检测结果
• 3.4.4 刺激性试验结果
• 3.5 “乳炎消”对奶山羊乳房炎的治疗结果
• 3.5.1 奶山羊总体状态变化
• 3.5.2 “乳炎消”对奶样中细菌的作用
• 3.5.3 奶山羊左侧乳腺产奶量变化
• 3.5.4 实验各组奶山羊右侧乳腺平均产奶量
• 3.5.5 乳清中白蛋白、丙氨酸氨基转移酶和乳酸脱氢酶含量
• 3.5.6 乳炎消对临床奶牛乳房炎治疗效果的分析
• 3.5.7 乳腺上皮细胞培养结果
• 4 讨论
• 4.1 奶牛乳房炎病原菌的分析
• 4.2“乳炎消”体外抑菌试验结果的讨论
• 4.3“乳炎消”安全性的讨论
• 4.4 “乳炎消”灌注剂对奶山羊乳房炎的治疗结果的分析
• 4.4.1“乳炎消”的抑菌效果与产奶量关系
• 4.4.2 乳清中与乳房炎有关的酶的含量变化
• 4.4.3 “乳炎消”对试验性奶山羊乳房炎模型的影响
• 4.5“乳炎消”对临床奶牛乳房炎治疗效果的影响
• 4.6 乳腺上皮细胞培养失败原因的探究
• 5 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 论文发表情况
• 硕士学位论文内容简介及自评