论文摘要
目的观察靶向Notch-1基因的小干扰RNA （siRNA）对人脑胶质母细胞瘤干细胞裸鼠体内成瘤性的影响。方法采用无血清培养法（DMEM/F12培养基,含2%B27、LIF、EGF、b-FGF各20ng/mL）从人脑胶质瘤母细胞瘤（GBM）细胞系TJ905中提取GBM肿瘤干细胞,并使用免疫荧光的方法对其CD133和Nestin抗原的表达进行检测鉴定。使用OligofectamineTM将靶向Notch-1基因的siRNA转染人脑胶质母细胞瘤干细胞中,并设立无意序列siRNA （nonsense siRNA）转染组。然后,把经Notch-1 siRNA和经无意序列siRNA转染的细胞及未经转染的细胞分为三组,每组细胞悬液注射裸鼠5只,观察动物的成瘤情况,并记录裸鼠移植瘤的体积v=1／2ab2（a为肿瘤的长径,b为肿瘤的宽径）,观察20天后处死动物,取出肿瘤组织,常规石蜡包埋,组织切片HE染色并进行Notch-1的免疫组化染色测定。结果1.通过无血清培养的GBM细胞系细胞中只有少数会形成肿瘤细胞球。2.这种细胞球经免疫荧光检测其CD133和Nestin抗原高表达,证实其为胶质瘤肿瘤干细胞。3.经靶向Notch-1基因的siRNA转染后可以有效抑制GBM干细胞裸鼠皮下移植瘤的生长,Notch-1 siRNA转染组与Nonsense siRNA转染组,以及Notch-1 siRNA转染组与对照组之间比较均有统计学意义（p<0.05）。4.免疫组化结果显示：Notch-1的表达在Notch-1 siRNA转染组与其它两组之间的比较也同样具有统计学意义（p<0.01）。结论人脑胶质母细胞瘤（GBM）细胞中可以通过无血清培养分离出悬浮生长的肿瘤干细胞球,这种GBM肿瘤干细胞的动物体内成瘤性高于GBM细胞；靶向Notch-1基因的小干扰RNA可以通过有效地降低肿瘤干细胞Notch-1的表达来抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,但还需要对siRNA的合理的使用剂量与转染方式进行更加深入的研究。
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