松仁多肽的制备及其免疫活性研究

论文摘要

红松（Pinus koraiensis Sieb.et Zucc）,是主产于中国小兴安岭的珍贵树种。红松仁是一种营养价值很高的果品,富含蛋白质、氨基酸、脂肪酸、维生素、矿物质及其它生理活性物质,具有广阔的应用开发潜力。本文以红松松仁为原料,利用现代分离分析手段,对松仁蛋白的提取工艺、酶解条件优化,松仁多肽的分子量分布估测以及免疫活性进行了研究,主要结果如下:1、分别采用碱提酸沉法和超声波提取法提取松仁蛋白,最佳工艺条件依次为:碱浓度0.10mol/L,料液比1:14,50℃下提取时间90min;超声时间15min,超声功率为900W,料液比1:10。两种方法的松仁蛋白提取率分别为67.45%和97.65%。超声波提取法可以有效地提高松仁蛋白质的提取率,缩短反应周期。具有高效、节能的优点。2、选择Alcalase蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶作为松仁蛋白酶解制备松仁多肽的备用酶,对松仁蛋白进行酶解效果研究,根据其水解程度,确定Alcalase蛋白酶为松仁蛋白酶解的最佳用酶。在此酶作用下得到最优酶解条件为:酶解温度为50℃、pH值为8、酶解时间为150min、酶用量为5000U/g、底物浓度为8%。松仁蛋白酶解的水解度为30.06%。底物浓度对其酶解具有显著性影响,其次是酶用量。3、松仁多肽粗品（PNPC）经Sephadex G-25凝胶过滤层析分离纯化,得到了三个主要级分,分别为PNP1～2,PNP3和PNP4～7,选择几种低分子量标准蛋白,采用此方法测定其分子量分布,三个主要级分的分子量分布大致为:大于23105Da、3776Da左右、小于249Da。根据生物活性肽的定义,选取活性最高的PNP3组分研究,进行氨基酸种类与含量的分析,推测松仁多肽精品（PNPP,即PNP3）具有免疫调节作用。4、对PNPP的免疫调节作用进行验证性试验,实验结果显示各剂量组均能显著增加小鼠免疫器官的重量,对小鼠的细胞免疫功能、体液免疫功能和单核—巨噬细胞吞噬功能也均有促进作用,表明PNPP具有免疫调节作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 绪论
• 1.1 松仁的研究现状
• 1.1.1 松仁的成分
• 1.1.2 松仁的功能
• 1.2 松仁蛋白质的研究现状
• 1.3 蛋白质提取的研究现状
• 1.3.1 水溶液提取法
• 1.3.2 有机溶剂提取法
• 1.3.3 酶法
• 1.3.4 超声波提取法
• 1.3.5 反胶团相转移法
• 1.4 生物活性肽的研究现状
• 1.4.1 生物活性肽的来源
• 1.4.2 生物活性肽的制备方法
• 1.4.3 生物活性肽的生理功能
• 1.5 松仁多肽的研究现状
• 1.6 研究内容和意义
• 2 松仁蛋白质的提取工艺研究
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 试剂
• 2.1.3 主要仪器及设备
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 脱脂松仁粉营养指标的测定
• 2.2.2 工艺流程
• 2.2.3 松仁蛋白质的测定
• 2.2.4 碱提酸沉法提取松仁蛋白的工艺研究
• 2.2.5 超声波法提取松仁蛋白的工艺研究
• 2.2.6 松仁蛋白质等电点的测定
• 2.2.7 松仁蛋白质变性温度的测定
• 2.2.8 数据处理方法
• 2.3 试验结果与讨论
• 2.3.1 脱脂松仁粉营养成分分析结果
• 2.3.2 标准曲线
• 2.3.3 碱提酸沉法提取松仁蛋白质的工艺研究结果
• 2.3.4 超声波法提取松仁蛋白质的工艺研究结果
• 2.3.5 超声波提取法与碱提酸沉法的比较
• 2.3.6 松仁蛋白质等电点的测定结果
• 2.3.7 松仁蛋白质变性温度的测定结果
• 2.4 本章小结
• 3 松仁蛋白多肽的制备
• 3.1 试验材料
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 试剂
• 3.1.3 主要仪器及设备
• 3.2 试验方法
• 3.2.1 松仁粗蛋白营养指标的测定
• 3.2.2 工艺流程
• 3.2.3 酶活力的测定及选择
• 3.2.4 水解度的测定
• 3.2.5 酶解条件的优化
• 3.2.6 松仁多肽的分子量测定
• 3.2.7 松仁蛋白质的氨基酸组成的测定
• 3.2.8 数据处理方法
• 3.3 试验结果与讨论
• 3.3.1 松仁蛋白营养成分分析结果
• 3.3.2 酶种类的选择
• 3.3.3 松仁蛋白酶解条件的确定
• 3.3.4 凝胶层析标准曲线
• 3.3.5 松仁多肽分子量大小的分布
• 3.3.6 松仁多肽的氨基酸分析
• 3.4 本章小结
• 4 松仁多肽的免疫活性研究
• 4.1 试验材料
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 试剂
• 4.1.3 主要仪器及设备
• 4.2 试验方法
• 4.2.1 试验动物及分组
• 4.2.2 脏器/体重的测定
• 4.2.3 细胞免疫功能的测定
• 4.2.4 体液免疫功能的测定
• 4.2.5 单核—巨噬细胞功能的测定
• 4.2.6 数据处理方法
• 4.3 试验结果与讨论
• 4.3.1 松仁多肽对小鼠脏器/体重比值的影响
• 4.3.2 松仁多肽对小鼠细胞免疫功能的影响
• 4.3.3 松仁多肽对小鼠体液免疫功能的影响
• 4.3.4 松仁多肽对小鼠单核—巨噬细胞功能的影响
• 4.4 本章小结
• 结论
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢