论文题目: 灵芝多糖抗病毒和抗肿瘤作用机制研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 微生物学
作者: 刘静
导师: 叶林柏
关键词: 灵芝多糖,抗病毒,疱疹病毒,流感病毒,半数细胞感染剂量,空斑试验,定量,血凝试验,抗肿瘤,细胞因子,杀伤性淋巴细胞
文献来源: 武汉大学
发表年度: 2005
论文摘要: 从发酵得到的灵芝菌丝体中分离得到一种多糖成分GLP,并对它的细胞毒作用、抗病毒活性及抗肿瘤作用进行了研究。采用热水抽提和乙醇沉淀的方法从灵芝菌丝体中得到灵芝多糖的粗制品,再用离子交换和分子筛的方法从多糖中分离得到5个不同的峰的灵芝多糖,经含量测定证明第二个峰所含有的灵芝多糖占总的多糖含量的42%,分子量测定表明该峰的多糖的分子量约为30～50Kda,硫酸—酚试验和Lowry-Folin试验分别检测多糖和蛋白质的含量分别为86.4%和8.3%,多糖与蛋白质的比例为10.4:1,命名该峰的多糖为GLP。 采用台盼兰和MTT法检测了GLP对体外培养的非洲绿猴肾细胞Vero细胞的毒性作用。结果表明,GLP对Vero细胞无毒,即使GLP浓度高达2000μg/mL,GLP对细胞也没有任何毒副影响,细胞的活力仍可达到98%以上。 GLP能够抑制单纯疱疹病毒Ⅰ型（herpes simplex virus type 1,HSV-1）和单纯疱疹病毒Ⅱ型（herpes simplex virus type 2,HSV-2）感染Vero细胞并抑制病毒感染引起的细胞病变。CCID50试验表明,GLP能强烈地抑制单纯疱疹病毒Ⅰ型和单纯疱疹病毒Ⅱ型感染细胞。在病毒感染细胞前将GLP和疱疹病毒混合孵育1小时,然后再感染Vero细胞,GLP抑制单纯疱疹病毒Ⅰ型和单纯疱疹病毒Ⅱ型的EC50(50%effective concentration,EC50)值分别为15.37和16.75μg/mL;如果GLP不预先与病毒孵育而和病毒同时加入到Vero细胞中,这时GLP抑制单纯疱疹病毒Ⅰ型和单纯疱疹病毒Ⅱ型的EC50值分别为17.22和18.91μg/mL;但是在单纯疱疹病毒Ⅰ型和单纯疱疹病毒Ⅱ型感染Vero细胞2小时后再加入GLP,这时GLP抑制单纯疱疹
论文目录:
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英文摘要
引言
第一章 前言
1 灵芝的有效成分
1.1 子实体多糖
1.2 菌丝体多糖
1.3 灵芝的其它活性成分
2 灵芝多糖的结构与生物活性之间的关系
3 灵芝多糖的分离纯化及分析方法
3.1 多糖的提取
3.2 多糖的分离纯化及鉴定
4 发酵培养灵芝菌丝体的研究现状
5 灵芝多糖的药理作用
5.1 抗病毒作用
5.2 免疫调节作用
5.3 抗肿瘤作用
5.4 其它药理作用
6 抗病毒药物的研究现状
6.1 病毒的致病机理
6.2 抗病毒药物的作用机理
7 抗肿瘤药物的研究现状
7.1 以细胞信号转导分子为靶点的抗肿瘤药物
7.2 新生血管生成抑制剂
7.3 端粒酶抑制剂
7.4 反义药物
7.5 肿瘤耐药逆转剂
7.6 分化诱导剂
7.7 导向治疗剂
7.8 基因治疗
7.9 抗癌中草药
8 本研究的意义
8.1 灵芝多糖的抗病毒作用机制
8.2 灵芝多糖的抗肿瘤作用机制
第二章 研究方法
2.1 灵芝多糖粗制品的提取
2.2 灵芝多糖的纯化
2.3 GLP纯度的鉴定
2.4 苯酚-硫酸法测多糖含量
2.5 细胞的复苏
2.6 细胞的传代
2.7 MTT比色法
2.8 台盼兰染色法
2.9 病毒CCID_(50)测定
2.10 空斑实验方法
2.11 病毒毒力的确定
2.12 病毒基因组DNA的提取
2.13 实时定量PCR方法
2.14 从琼脂糖凝胶中回收DNA
2.15 血凝试验及血凝抑制试验
2.16 流式细胞仪检测CD_4~+和CD_8~+细胞
2.17 细胞因子的放射免疫试剂盒检测
第三章 GLP抗病毒作用机制研究
3.1 材料与方法
3.2 结果
3.3 讨论
第四章 定量PCR和空斑减少试验方法检测GLP的抗病毒作用机理
4.1 材料与方法
4.2 结果
4.3 讨论
第五章 GLP抑制流感病毒的实验研究
5.1 材料与方法
5.2 结果
5.3 讨论
第六章 GLP的抗肿瘤作用机制研究
6.1 材料与方法
6.2 结果
6.3 讨论
参考文献
读博士期间发表和待发表的研究论文
致谢
发布时间: 2006-03-27
参考文献
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