以壳聚糖为载体制备适合于抗体分离的介质研究

论文摘要

为了找寻可替代现有的葡聚糖、琼脂糖等昂贵多糖介质的可替代品,本论文以来源丰富的壳聚糖为原料,采用反相悬浮法制备壳聚糖微球,经环氧氯丙烷（ECH）活化,亚氨基二乙酸（IDA）螯合金属离子制备适于抗体纯化的新型壳聚糖分离介质,并以此为基础,开展了纯化人绒毛膜促性腺激素（hCG）单克隆抗体的研究。主要研究结论如下：通过对微球制备过程中各影响因素的研究,获得了较佳的制备条件,结果表明,当乙酸浓度2%、壳聚糖浓度3%、交联剂用量为2.5 mL、搅拌速度为350 r/min、油水体积比为1:1.5、NaOH溶液浓度为2.5mol/L,成球率可达到90%以上,球形好,分布窄的红棕色壳聚糖微球。以自制的壳聚糖微球为载体,ECH为活化剂,IDA为螯合剂,制备新型的壳聚糖分离介质,其较佳制备工艺为：在DMSO（0.4,体积分数）和0.6 mol/L NaOH混合溶液反应体系中,加入10%ECH（体积分数）,在40℃反应4h,此时环氧基修饰密度可达到0.15 mmol/g;然后键合IDA,在0.6 mol/L IDA和NaOH（2.0 mol/L）混合溶液体系中,60℃条件下反应6 h,制备的新型壳聚糖分离介质对Cu2+吸附量达到172.79 mg/g（干介质）,以BSA为标准蛋白,考察壳聚糖分离介质的吸附性能,结果表明,其对BSA的吸附符合Langmuir吸附特征,最大吸附量qm为60.61 m∥g,KD为1.39,3 h后达到吸附平衡。利用自制的壳聚糖分离介质为固定相,纯化hCG单抗。结果表明：在pH 8.0,20 mM磷酸缓冲液+0.5 M NaCl条件下上样,然后在20 mM醋酸钠缓冲液+0.5M NaCl条件下通过pH分步洗脱,当pH=5.0时得到抗体峰,纯度大于61%,回收率达57%。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一章 绪论
• 1.1 壳聚糖的理化性质
• 1.1.1 壳聚糖的结构
• 1.1.2 壳聚糖的化学性质
• 1.2 金属螯合亲和层析介质研究进展
• 1.2.1 葡聚糖和琼脂糖
• 1.2.2 硬性基质
• 1.2.3 壳聚糖/甲壳素
• 1.2.4 纤维素
• 1.2.5 磁化或超顺磁化介质
• 1.2.6 膜介质
• 1.3 交联壳聚糖的合成方法
• 1.3.1 交联法
• 1.3.2 分子印迹法
• 1.3.3 微波法交联壳聚糖
• 1.3.4 喷雾干燥法
• 1.3.5 溶剂蒸发法
• 1.4 壳聚糖分离介质的应用
• 1.4.1 壳聚糖分离介质在生物工程中的应用
• 1.4.2 壳聚糖分离介质在医药工程中的应用
• 1.4.3 壳聚糖分离介质在环保工业的应用
• 1.5 本课题的研究目的及内容
• 1.5.1 本课题的研究目的
• 1.5.2 本课题的主要研究内容
• 第二章 壳聚糖微球的制备
• 2.1 前言
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 实验材料
• 2.2.2 壳聚糖微球交联原理
• 2.2.3 壳聚糖微球的制备方法
• 2.2.4 壳聚糖微球孔度值（P）的表征
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 单因素实验条件对壳聚糖微球制备的影响
• 2.3.2 正交试验条件对壳聚糖微球性能的影响
• 2.3.3 正交验证性实验
• 2.3.4 壳聚糖微球溶解性实验
• 2.3.5 壳聚糖微球的物性表征
• 2.3.6 壳聚糖微球红外图谱
• 2.3.7 壳聚糖微球粒径测定
• 2.4 本章小结
• 第三章 新型壳聚糖分离介质的制备
• 3.1 引言
• 3.2 材料与方法
• 3.2.1 实验材料
• 3.2.2 合成原理
• 3.2.3 新型壳聚糖微球的制备
• 3.2.4 环氧基修饰密度的定量分析
• 2+螯合量的测定'>3.2.5 Cu²⁺螯合量的测定
• 3.2.6 蛋白质吸附实验
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 活化条件的选择
• 3.3.2 螯合配基反应条件的选择
• 3.3.3 吸附动力学曲线
• 3.4 本章小结
• 第四章 新型壳聚糖分离介质纯化HCG单抗的研究
• 4.1 引言
• 4.2 材料与方法
• 4.2.1 主要试剂及仪器
• 4.2.2 实验方法
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 溶液pH对抗体吸附的影响
• 4.3.2 溶液离子强度对抗体吸附的影响
• 4.4 本章小结
• 第五章 结论与展望
• 5.1 结论
• 5.2 展望
• 附常用试剂的配制
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表论文情况
• 攻读硕士学位期间项目申请情况
• 攻读硕士学位期间申请专利情况