大Y染色体临床效应及其形成机理初步研究

论文摘要

染色体多态性是指人类群体中染色体形态存在的微小差异。传统的遗传学认为,染色体多态性通常不具有明显的表型或病理学意义。但越来越多的研究表明,染色体多态性可产生临床效应,与生殖异常有关,包括早期复发性自然流产、早期胚胎停止发育、胎儿畸形等。大Y染色体是常见的染色体多态性。据统计,大Y染色体在生殖异常的男性患者中的比例达2.18%-21.73%。随着生殖辅助技术的日益发展,许多不孕不育的患者求助于体外受精-胚胎移植技术,其中不乏有大Y患者。关于大Y的形成机理的研究较少。Yassmine对一例胎儿的产前诊断及出生后诊断均为Yqh+／Yqh-嵌合体,推测这种情况可能是来源于合子形成后DYZ区的缺失或者姐妹染色单体的不平等交换。由此推测大Y的形成可能与DYZ区相关。DYZ（human Y-chromosome specific repeated DNA family）是指人类Y染色体上特异性的重复序列,现在已经确定的包括DYZ1、DYZ2和DYZ3。其中DYZ1是Y染色体长臂远端的异染色质中主要串联重复序列,占Y染色体总长度的约40%。DYZ1长度为3.6kb,2000-4000次为其在正常男性人类的重复次数。Deepali等将暴露于射线的男性与复发性自然流产（Recurrent spontaneousabortion, RSA）患者丈夫的DYZ1稳定性进行比较,发现后者的不稳定性更加常见,推测DYZ1在Y染色体的折叠和结构完整性方面有关键作用。基于以上研究背景,本研究首先通过回顾性临床研究来探讨大Y染色体对体外受精-胚胎移植结局的影响。然后,通过对Y染色体上DYZ1完整性及拷贝数检测研究其在Y染色体多态性患者和早期复发性流产患者丈夫中的变化,以期探讨DYZ1在Y染色体多态性和早期复发性流产所起的作用。第一部分：大Y染色体对体外受精-胚胎移植结局的影响【目的】通过回顾性研究探讨大Y染色体对体外受精-胚胎移植结局的影响。【方法】选取2006年1月至2008年12月在山东大学附属省立医院生殖医学中心完成的体外受精.新鲜胚胎移植周期。其中,男方染色体G显带为大Y（Y≥18号染色体）且其妻排除已知的影响体外受精.胚胎移植结果的疾病的治疗周期为大Y组（33例患者,47个治疗周期）,同期在本中心进行体外受精-鲜胚移植治疗的其他治疗周期为群体对照组（共6620个治疗周期）。【结果】大Y组与群体对照组比较,其受精率、卵裂率、优质胚胎率、种植率、妊娠率、早期流产率等各项指标的差异无统计学意义（P>0.05）,但在畸形率、出生性别比例方面,两组比较差异具有统计学意义（P<0.05）,即大Y组畸形儿出生与出生女孩所占比例有明显升高。【结论】大Y染色体对体外受精-胚胎移植的胚胎发育及近期妊娠结果均无显著性影响,但在大Y染色体患者的妻子行体外受精-胚胎移植时,女孩更易出生。第二部分：DYZ1稳定性在Y染色体多态性和早期复发性流产中的研究【目的】通过对DYZ1完整性及拷贝数检测,探讨DYZ1在Y染色体多态性和早期复发性流产中所起的作用。【方法】对同期就诊于本中心的男性的DYZ1进行研究。其中,不明原因早期RSA患者丈夫106例；Y染色体多态性患者86例,包括大Y患者（Y≥18号染色体）79例和小Y患者（Y≤21号染色体）7例,同期就诊的已正常生育并排除染色体异常的男性100例。【结果】通过PCR电泳,在RSA患者丈夫中1例存在DYZ1头部的266个碱基（第25-290个碱基）缺失,2例存在DYZ1中部的773个碱基缺失（第1347-2119碱基）；在小Y患者中2例存在DYZ1头部的266个碱基（第25-290个碱基）缺失,4例存在中部的773个碱基缺失（第1347-2119碱基）和尾部的275个基因缺失（第3128-3420碱基）；在大Y患者和正常生育者中未发现DYZ1部分缺失。通过实时荧光定量PCR,正常生育男性的DYZ1拷贝数平均为3900；大Y患者的平均值为5571,与正常生育者比较差异有统计学意义（P<0.007）,即大Y患者DYZ1拷贝数比正常生育男性多；小Y患者的平均值为1059,与正常生育者比较差异有统计学意义（P<0.001）,即小Y患者DYZ1拷贝数比正常生育男性少；RSA患者丈夫的平均值为2655,与正常生育者比较差异有统计学意义（P<0.001）,即RSA患者丈夫DYZ1拷贝数比正常生育男性少。【结论】DYZ1拷贝数增多可使显微镜下可视的Y染色体长度增加；DYZ1部分缺失和拷贝数减少可使显微镜下可视的Y染色体长度减少；DYZ1拷贝数正常范围内显著减少可能是早期复发性自然流产的病因之一。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 符号说明
• 前言
• 第一部分 大Y染色体对体外受精-胚胎移植结局的影响
• 资料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 第二部分 DYZ1稳定性在Y染色体多态性和早期复发性产中的研究
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 附图
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文目录
• 学位论文评阅及答辩情况表