防治烟草黑胫病拮抗微生物的筛选与应用研究

论文摘要

为了筛选对烟草黑胫病菌拮抗效果好的菌株,从甘肃天水、江苏南京、湖南常德和湖南张家界等地的健康烟草、辣椒、番茄地土壤中分离到放线菌菌株212株,通过平板对峙法和生长速率法进行筛选,筛出对烟草黑胫病菌拮抗效果最好的两株,分别为GSF11和CDF12。培养5天后,抑菌率分别为77.8%和65.1%。经初步鉴定这两株放线菌均属链霉菌属(Streptomyces spp.)。初步测定拮抗菌GSF11和CDF12的最佳培养方案。根据试验结果,确定了最佳发酵条件:GSF11产生抗菌物质的最佳培养时间是120小时,最佳培养液为5号培养液,最佳培养温度为30±1℃,产生抗菌物质的发酵液的最适初始pH值为6.0,最佳培养方式为全天振荡培养。CDF12产生抗菌物质的最佳培养时间是120小时,最佳培养液方案为5号培养液,最佳培养温度为28±1℃,产生抗菌物质的发酵液的最适初始pH值为7.0,最佳培养方式为全天振荡培养。初步测定GSF11和CDF12发酵液的效价均为400倍。对其抗菌谱进行了初步的测定,结果表明发酵液对四个靶标病原真菌的拮抗效果存在着很大差异。四个靶标病原真菌中,对小麦赤霉病菌的拮抗效果最好,GSF11和CDF12的抑菌率分别为72.3%和57.9%。其次为花生黑斑病,GSF11和CDF12对它的抑菌率分别为48.6%和29.3%。GSF11和CDF12对辣椒疫病的抑菌率分别为35.9%和20%。对水稻恶苗病的抑菌率分别为41.9%和31.7%。并且对两株拮抗放线菌的拮抗效果的稳定性进行了测定,两菌株经过连续转管培养后,抑菌能力均出现下降趋势。作用机制的研究表明GSF11和CDF12的发酵液能抑制烟草黑胫病原菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)菌丝的生长。GSF11和CDF12的发酵液能诱导烟草体内的抗性相关酶如过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸氨解酶(PAL)酶活性的增加,从而可能对烟草产生诱导抗性。通过离体和盆栽试验表明供试拮抗菌的发酵液均可以不同程度地降低烟草黑胫病的病情指数。GSF11和CDF12盆栽试验的最佳相对防效分别为58.67%和50.67%。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 综述
• 1 利用拮抗微生物来防治烟草黑胫病
• 1.1 利用根际拮抗细菌和放线菌类生防菌防治烟草黑胫病
• 1.2 利用真菌类生防菌防治烟草黑胫病
• 2 拮抗菌的发酵条件的优化
• 2.1 培养基的选择
• 2.2 发酵培养
• 2.3 发酵产物检测方法
• 2.4 培养基配方的选择
• 2.5 培养条件对拮抗菌株产抗生素的影响
• 3 问题与对策
• 4 研究的目的和意义
• 5 技术路线
• 第二章 烟草烟草黑胫病病原菌的分离纯化和拮抗菌的筛选与鉴定
• 1 材料与方法
• 1.1 土壤的采集和保存
• 1.2 烟草黑胫病病原菌的的分离和纯化
• 1.3 烟草黑胫病菌拮抗菌的分离和筛选
• 1.3.1 选择性培养基
• 1.3.2 分离方法
• 1.4 生物测定
• 1.4.1 拮抗性初步测定
• 1.4.2 复筛法
• 1.5 拮抗放线菌分类地位的的确定
• 1.6 生理生化特性鉴定
• 1.6.1 明胶液化
• 1.6.2 代谢产物测定（H2S的产生）
• 1.6.3 淀粉酶的测定
• 1.6.4 纤维素的利用
• 2 结果与分析
• 2.1 拮抗放线菌的分离和拮抗性测定
• 2.2 拮抗放线菌发酵液对烟草黑胫病病原菌的拮抗作用测定
• 2.3 拮抗放线菌分类地位的确定
• 2.4 拮抗菌的生理生化特性鉴定
• 3 讨论
• 第三章 烟草黑胫病菌拮抗菌发酵条件的初步研究
• 1 材料与方法
• 1.1 供试拮抗菌株
• 1.2 培养基原料
• 1.3 靶标病原真菌
• 1.4 发酵滤液的制备和抗菌活性的测定
• 1.5 发酵条件的研究
• 1.5.1 生长动态变化的研究
• 1.5.2 不同培养液对产生抗菌物质的影响
• 1.5.3 不同摇瓶装液量对产生抗菌物质的影响
• 1.5.4 不同温度的影响
• 1.5.5 pH值的影响
• 1.5.6 振荡方式的影响
• 1.6 发酵液效价的测定
• 1.7 发酵液对病原真菌的抑制作用
• 1.8 抗菌效果稳定性测定
• 2 结果与分析
• 2.1 GSF11和CDF12生长动态变化
• 2.2 发酵培养液配方的选择
• 2.3 不同摇瓶装液量对产生抗菌物质的影响
• 2.4 不同温度对产生抗菌物质的影响
• 2.5 pH值对产生抗菌物质的影响
• 2.6 振荡方式对产生抗菌物质的影响
• 2.7 发酵液效价的测定
• 2.8 发酵液对病原真菌的抑制
• 2.9 抗菌效果稳定性测定
• 3 讨论
• 第四章 拮抗菌防治烟草黑胫病的作用机制
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 对菌丝生长的抑制作用
• 1.3 抗性相关酶活性变化的影响
• 1.3.1 过氧化物酶（POD）的活性测定
• 1.3.2 多酚氧化酶（PPO）酶的活性测定
• 1.3.3 苯丙氨酸解氨酶（PAL）的活性测定
• 2 结果与分析
• 2.1 对菌丝生长的抑制作用
• 2.2 抗性相关酶活性变化研究
• 3 讨论
• 第五章 拮抗放线菌防治烟草黑胫病离体、盆栽试验
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.2.1 烟草黑胫病菌抱子液的制备
• 1.2.2 拮抗菌发酵液的制备
• 1.2.3 离体叶片的准备和接种
• 1.2.4 温室盆栽试验
• 1.2.5 烟草黑胫病菌接种
• 1.2.6 拮抗放线菌的接种方法
• 2 结果与分析
• 2.1 离体防效试验结果
• 2.2 温室盆栽试验结果
• 3 讨论
• 第六章 结论
• 1 总结
• 2 进一步的研究设想
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历