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p16基因转染对大肠癌细胞周期及放射敏感性的实验研究

2020-11-29阅读(680)

p16基因转染对大肠癌细胞周期及放射敏感性的实验研究

论文摘要

大肠癌是最常见的恶性肿瘤之一，近年来其发病率及死亡率有着逐年上升的趋势，且复发后再次手术切除率低，因此如何有效治疗复发灶，提高病人的总体生存率，是目前研究的重点与热点课题。术后的辅助性放疗亦是治疗大肠癌的主要手段之一，然而肿瘤对放射不敏感或对放射产生抗拒性已被公认。如何进一步提高肿瘤对放射治疗的敏感性，是人们致力解决的问题。基因联合放射治疗肿瘤开辟了新的思路。有关p16基因在大肠癌中与放射治疗的关系，国内外尚未见文献报道。本研究用免疫组化的方法检测p16基因在大肠癌组织中的缺失情况，并通过导入外源性p16基因的方法,使得p16基因的表达在大肠癌细胞得以恢复，以研究其对大肠癌细胞周期的影响及导入p16基因后放射对细胞抑制率的变化，探讨p16基因提高放射敏感性的机制。为基因联合放射治疗肿瘤提供进一步实验依据。

论文目录

  • 提要
  • 主要缩略词表
  • 引言
  • 第一部分 大肠癌中p16 蛋白的表达及临床意义
  • 一. 材料与方法
  • 1. 研究对象
  • 2. 主要试剂
  • 3. 主要仪器
  • 4. 主要试剂的配制
  • 5. 实验方法
  • 6. 结果判断
  • 7. 统计学处理
  • 二. 结果
  • 1. p16 在大肠癌组织与正常大肠组织中的表达
  • 2. p16 在不同病理学分级大肠癌组织中的表达
  • 3. p16 在不同Dukes 分期大肠癌组织中的表达
  • 4. 免疫组化染色结果
  • 三. 讨论
  • 第二部分 pcDNA3+-p16 质粒的构建及鉴定
  • 一. 实验材料与设备
  • 1. 材料和试剂
  • 2. 主要仪器
  • 3. 主要试剂的配制
  • 二. 实验方法
  • 1. p16 基因片段的获得
  • 2. p16 基因的PCR 扩增
  • 3. 扩增产物的鉴定
  • 4. PCR 产物的纯化
  • 5. 质粒的重组连接
  • 6. 感受态细胞的制备及转化
  • 7. 重组质粒的酶切鉴定及测序
  • 8. 重组质粒的提取与纯化回收
  • 三. 结果
  • 1. p16 基因的PCR 扩增结果
  • 2. 重组质粒的鉴定结果
  • 四. 讨论
  • 第三部分 p16 基因转染及放射对大肠癌细胞的影响
  • 一. 实验材料与设备
  • 1. 主要材料与试剂
  • 2. 主要仪器
  • 3. 质粒
  • 4. 主要试剂的配制
  • 5. 细胞系
  • 二. 实验方法
  • 1. SWWC 细胞的培养
  • 2. 脂质体Lipofectamine 介导基因转染
  • 3. 免疫组织化学法检测细胞p16 蛋白的表达
  • 4. 流式细胞技术检测细胞周期变化
  • 5. RT-PCR 检测细胞p16mRNA 的表达
  • 6. Western blot 检测细胞p16 蛋白的表达
  • 7. 细胞抑制率的计算
  • 8. 统计学处理
  • 三. 结果
  • 1. 细胞的转染和筛选
  • 2. 免疫组化检测细胞p16 蛋白表达
  • 3. 流式细胞技术显示细胞周期的变化
  • 4. 细胞p16mRNA 的表达及表达含量
  • 5. 细胞p16 蛋白的表达及表达灰度
  • 6. 细胞OD 值及抑制率的变化
  • 四. 讨论
  • 结论
  • 本研究创新之处
  • 综述
  • 综述一：p16 基因的研究进展
  • 一. p16 基因的发现
  • 二. p16 基因的结构
  • 三. p16 基因的生物学特性
  • 四. p16 基因与肿瘤
  • 五. p16 基因与细胞周期
  • 综述二：放射治疗的现状及展望
  • 一. 放射治疗的机制
  • 二. 肿瘤的放射治疗现状
  • 三. 基因联合放射治疗
  • 参考文献
  • 附图
  • 博士期间发表的学术论文
  • 中文摘要
  • Abstract
  • 致谢

    • 相关论文文献

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