逆向点杂交方法检测结核分支杆菌耐药基因katG、rpoB突变

论文摘要

近年来受到人口流动性加大、人口老龄化、过分依赖卡介苗、人免疫缺陷病毒（HIV）与结核分支杆菌共感染、毒品及女性吸烟等诸多因素的影响,结核病死灰复燃,全球呈大回升之势。结核分支杆菌耐药性的产生和传播更加剧了结核病的流行。作为标准化疗的一线药物,利福平和异烟肼在结核病的治疗中发挥了重要的作用。然而,由于对这两种药物耐药株的产生使其联合治疗的有效率降低到77%。快速、准确的检测菌株的耐药情况不仅有助于选择最适的治疗方案继而提高治疗效果,而且有助于阻止耐药菌株的传播,因而具有非常重要的意义。研究表明,异烟肼耐药株的产生是由katG、inhA、kasA、ahpC、ndh等多基因控制的。其中,60%-70%的耐药株是由于katG基因第315位密码子突变所致,且这一突变与高耐药量密切相关。因此,katG基因是异烟肼耐药性检测的首选基因。利福平的耐药机制主要是由于编码RNA多聚酶β-亚基的rpoB基因发生突变,导致利福平无法与RNA聚合酶结合,引起结核分支杆菌耐药。约有90%～95%的利福平耐药株存在rpoB基因的突变,且均集中在编码511-533位共23个氨基酸的69bp核心突变区,因此,通过对该区域基因序列的分析可以检测对利福平的耐药性。而在各个国家和地区,这些位点突变的几率均有差异,在我国,最近一篇文献报道,在利福平耐药的结核分支杆菌中,526位突变占40%,531位突变占41%,516位突变仅占4%。 我国结核分支杆菌耐多药情况同样令人担忧:初始耐药率为28.1%,继发耐药率为41.1%,并且均以耐异烟肼、利福平一线药物为主,耐多药（MDR）现象严重,所以耐药性问题己构成了对结核病控制规划的严重威胁。因此对抗结核药物耐药性进行系统研究和检测,建立先进的耐药性测定方法,以指导结核病的防治具有十分重要的现实意义。 开展这方面的研究,准确,全面的检测katG、rpoB基因突变十分必要。目前已有文献报道多种分子生物学检测方法用于检测这两个基因的突变,如SSCP法,RFLP法,实时PCR法,线性探针杂交法:这些方法都有自身的优缺点,且大部分不能同时对katG、rpoB基因突变进行捡测。目前,国际上已有商业化的INNO-LiPA Rif TB检测试剂盒（比利时Innogenetics NN公司）可以检测出rpoB基因第531位、第526位四种耐药突变,具有简便、快捷,特异性、敏感性较强的特点,临床指导用药效果良

论文目录

• 英文缩写
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 katG基因315位突变在中国人群中的分布特点及逆向点杂交方法检测katG基因315位突变
• 材料
• 方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分 逆向点杂交方法检测结核分支杆菌耐药基因katG、rpoB突变
• 材料
• 方法
• 结果
• 讨论
• 总结
• 综述
• 致谢
• 附录