六味地黄汤对淋巴细胞凋亡干预作用的研究

论文摘要

六味地黄丸（汤）是中医临床常用的经典滋阴补肾中药复方,方出《小儿药证直决》由熟地、山茱萸、山药、茯苓、泽泻、丹皮六味中药组成。 现代药理学研究表明六味地黄丸（汤）具有广泛的药理作用,但由于临床应用治疗的肾阴虚证中,有许多疾病与免疫功能异常相关,故其免疫药理作用备受关注。我们对该方的免疫药理作用也进行了一系列的研究,证明具有明显的免疫调节作用,其中该方拮抗糖皮质激素肾阴虚证造型过程中胸腺重量减轻这一现象引起了我们的注意,因为糖皮质激素引起的胸腺萎缩,与糖皮质激素诱导胸腺细胞凋亡有关,糖皮质激素诱导胸腺细胞凋亡,胸腺细胞减少,胸腺萎缩重量减轻。这种能拮抗糖皮质激素所致的胸腺重量减轻的作用,提示该方可能具有拮抗糖皮质激素诱导胸腺细胞凋亡的作用。 目的:本实验旨在以氢化可的松诱导淋巴细胞凋亡为模型,研究六味地黄汤对淋巴细胞凋亡的抑制作用,以揭示该方新的免疫药理作用及机制。 方法:一是根据病理形态学的改变,形态学能为细胞凋亡提供明显的实验证据;二是根据分子生物学及免疫组化技术,细胞凋亡最明显的生化特征是Ca2+、Mg2+依赖的内源性核酸酶的激活,将细胞核染色体从核小体间断裂,形成由大约180—200bp或其多聚体组成的寡核甘酸片段。针对这些寡聚核甘酸片段我们采取了琼脂糖凝胶电泳DNA梯形条带法,进行了该方抗胸腺细胞凋亡的分子生物学研究工作。三是利用细胞学方法,即流式细胞术,观察直方图,看是否在二倍体细胞峰（Ap峰）的左方出现亚二倍体细胞峰（Ap峰）来判断是否存在细胞凋亡,并且可以通过Ap峰的高度来判断细胞凋亡率。 结果:1.六味地黄汤对胸腺和脾脏淋巴细胞凋亡作用的形态学研究中发现:六味地黄汤对胸腺和脾脏指数的减小有拮抗作用。并且六味地黄汤在拮抗小鼠胸腺和脾脏指数的减小作用优于白介素-2,且六味地黄汤在拮抗小鼠胸腺和脾脏指数的减小作用还与剂量有关,高剂量组优于低剂量组。电镜下可检出正常T细胞,染色质分布均匀,并可检出凋亡细胞,染色质固缩,凝聚在核膜周边成新月状。其他各组也可在电镜下检出数量不等的凋亡细胞。 2.六味地黄汤对胸腺和脾脏淋巴细胞凋亡作用的生化特征研究发现:五组均可检出DNA“Ladder”带。而且六味地黄汤各组条带颜色变浅,并呈量效关系。 3.六味地黄汤对胸腺和脾脏淋巴细胞凋亡作用的定量研究结果发现:六组均可经流式细胞仪检出明显的亚二倍体峰,六组之间凋亡率检测结果经方差

论文目录

• 前言
• 第一部分 文献研究
• 一、细胞凋亡与免疫学关系的研究进展
• （一）细胞凋亡
• （二）六味地黄汤（丸）的免疫药理研究进展及本实验研究进展
• 第二部分 实验研究
• 一、六味地黄汤对胸腺和脾脏淋巴细胞凋亡作用的形态学研究
• 1.材料
• 2.方法
• 3.结果
• 4.讨论
• 二、六味地黄汤对胸腺和脾脏淋巴细胞凋亡作用的生化特征研究
• 1.材料
• 2.方法
• 3.结果
• 4.讨论
• 三、六味地黄汤对胸腺和脾脏淋巴细胞凋亡作用的定量研究
• 1.材料
• 2.方法
• 3.结果
• 4.讨论
• 第三部分 结语
• 参考文献
• 附录
• 附件Ⅰ：本论文中使用的缩略语
• 附件Ⅱ：细胞凋亡的主要检测方法表（表1）
• 附件Ⅲ：胸腺凋亡细胞电镜结果（图1）
• 附件Ⅳ：小鼠胸腺的淋巴细胞凋亡水平检测（图3）
• 致谢