原发性肝癌的肝干细胞起源和诱导调控因素的初步研究

论文摘要

原发性肝癌的发生曾归因于成熟细胞的“去分化（dedifferentiation）”,但是,近年来研究认为它可能由肝干细胞（hepatic stem cell,HSC）分化不全或分化异常（disdifferentiation）所致。肝干细胞是一类具有长期自我更新和多向分化能力的细胞,除了来源于以肝内卵圆细胞（hepatic oval cell,HOC）为代表的原始细胞外,还可以来源于骨髓或外周循环系统干细胞的转化。肝干细胞在损伤修复中有重要作用,但是它也可以发生分化异常而导致肝癌,并在一定时期内延续肝干细胞的免疫标志。肝干细胞的激活、增殖和分化由组织微环境所决定,而机体内必然含有相关调控因子,并对干细胞来源的肿瘤的分化发生影响。本课题就原发性肝癌中肝干细胞的特征和肝癌的诱导调控条件进行初步探讨,旨在为原发性肝癌病理诊断、分子靶向治疗和诱导分化治疗,以及预后评估等提供理论依据。实验第一部分应用HE 染色、免疫组化方法观察53 例原发性肝癌,另用5 例肝硬化和4 例正常肝组织为对照;同时,应用透射电镜观察6 例肝细胞癌、1 例胆管癌、4例肝硬化和4 例正常肝组织。结果发现①在原发性肝癌组织中观察到肝干细胞（卵圆细胞）并向肝癌细胞转化;②肝细胞癌和肝内胆管细胞癌对CK7、CK19、c-kit、Thy-1、AFP 等干细胞免疫标志均有不同程度的表达。③观察到小细胞型、中间型和假腺管型肝细胞癌均缺乏分化且干细胞免疫标志表达较强。实验第二部分在体外培养肝癌细胞系HepG2 细胞,使用不同剂量的胎肝细胞、骨髓间充质干细胞的培养上清和白血病血清进行生长干预,应用倒置显微镜、电子显微镜、免疫组化、流式细胞仪和RT-PCR 等技术和方法,观察分析HepG2 细胞表型特征,以及条件培养液对肝癌细胞生长的影响。结果发现①肝癌细胞系HepG2 表达CK7、CK19、AFP、vimentin、c-kit、Thy-1、CD34 干细胞免疫标志物及相应的mRNA。②胎肝上清培养组,HepG2 细胞生长受抑,分化提高,生长分数随剂量增加而降低。③骨髓间充质干细胞培养上清和白血病血清培养组,HepG2 细胞生长速度加快,生长分数随剂量增加而升高。结论1. 在成体肝癌和癌旁组织中有以卵圆细胞为代表的肝干细胞的活化,原发性肝癌的发生可能与肝干细胞的分化受阻和（或）分化异常有关。

论文目录

• 主要英文缩略语
• 英文摘要
• 中文摘要
• 论文正文 原发性肝癌的肝干细胞起源和诱导调控因素的初步研究
• 第一部分 原发性肝癌中肝干细胞的观察
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 图片
• 第二部分 肝癌细胞系HepG2 的干细胞表型特征和生长影响因素
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 图片
• 附录1 原发性肝癌与肝干细胞关系的研究进展（文献综述）
• 附录2 攻读硕士学位期间发表的论文
• 附录3 致谢