中药复方中多糖的提取纯化及其对小鼠非特异免疫功能的影响

论文摘要

中草药是中华民族优秀的传统文化瑰宝,随着社会和科学的不断进步与发展,人类对疾病的不断认识以及健康观念的更新,国内外对中草药的研究已愈来愈寄予关注。中草药有效成分主要有：多糖、黄酮、苷类、有机酸、生物碱等生物活性物质。随着分子生物学的发展,逐渐认识到其中的多糖物质在动物、植物以及微生物等机体细胞中发现,是构成生命活动本质的三类生物大分子（多糖、蛋白质、核酸）的基本物质之一,参与细胞各种生命活动的调节。医药界对多糖的活性产生兴趣尤为浓厚,至今,国内已经报道过对一百多种中草药中的多糖成分进行了深入研究。研究者发现中草药中的多糖成分具有调节免疫功能、抗肿瘤、抗病毒、延缓衰老、抗氧化、降血脂、降血糖、抗感染等多种生理活性功能,其中的调节机体免疫活性倍受研究者关注。本试验采用无水乙醇处理中药复方散剂,水浸提其中总多糖成分,并利用大孔吸附树脂对中药复方多糖进行了分离纯化,在此基础上对多糖的免疫活性进行了初步研究。试验结果如下；1、以粉碎脱脂的中药复方为原料,按照料液比（中药复方：水）1：10,水浸泡提取时间为24h,提取次数为3次,经醇沉及除蛋白后,提取物中多糖含量为43.85%。经乙醇分级后,所得A1、A2、A3中多糖的含量分别为49.6%、50.5%、54.7%。2、通过静态及动态吸附试验,研究了AB-8型、LSA-5B型、DM-18型、CAD-40型、LX-1型、D941型六种大孔树脂对中药复方多糖的吸附及解吸性能。综合考虑,筛选出AB-8型大孔吸附树脂为分离纯化中药复方免疫增强剂多糖的最佳树脂。3、通过单因素试验和正交试验,确定了AB-8型大孔树脂吸附及解吸中药复方多糖的最佳条件：上样液浓度5.93 mg/mL,上样液体积1BV,上样速率2 BV/h；洗脱剂乙醇浓度50%,洗脱速率3BV/h,洗脱剂体积为3BV；在上述条件下,AB-8型大孔树脂对多糖的吸附率为74.3%,解吸率为93.6%。A1、A2、A3经大孔树脂纯化后,所得B1、B2、B3多糖的纯度分别达64.7%、79.8%、77.1%。4、不同组分、不同纯度中药复方多糖对小鼠免疫调节的影响。分别给小鼠灌服药物（复方总多糖、复方水煎剂、三种不同组分A1、A2、A3、高纯度三种不同组分B1、B2、B3、生理盐水）后,对小鼠的红细胞数,白细胞数,白细胞分类数,淋巴细胞的增殖,巨噬细胞的吞噬功能,EA花环形成率,T淋巴细胞酯酶染色率,免疫器官指数等免疫学指标进行测定,试验结果,发现A2、B2的免疫效果最好,优于其它各组。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 英文缩写词对照表
• 前言
• 文献综述
• 1 中药复方概述
• 1.1 中药及中药复方概述
• 1.2 中药化学成分的研究概况
• 2 多糖的提取、分离纯化研究
• 2.1 原料预处理及含量测定概况
• 2.2 提取方法概况
• 2.3 分离纯化研究
• 3 中药复方多糖免疫调节的研究
• 3.1 中药复方多糖对中枢免疫器官及外周免疫器官指数的研究
• 3.2 中药复方多糖对机体免疫细胞的研究
• 3.3 中药复方多糖对抗体生成的研究
• 3.4 中药复方多糖对细胞因子及补体系统的研究
• 4 多糖研究中的不足
• 5 展望
• 第一章 中药复方免疫增强剂多糖的提取研究
• 1 引言
• 2 试验材料
• 2.1 原料
• 2.2 仪器及试剂
• 3 试验方法
• 3.1 中药复方免疫增强剂多糖的提取路线
• 3.2 中药复方免疫增强剂多糖提取操作
• 3.3 多糖的含量测定
• 3.4 中药复方免疫增强剂多糖的醇沉分级
• 4 结果与分析
• 4.1 最大吸收波长
• 4.2 多糖含量测定标准曲线的制备
• 4.3 提取物中多糖的含量测定结果
• 4.4 醇沉分级后多糖含量测定结果
• 5 讨论与小结
• 第二章 大孔吸附树脂的筛选
• 1 引言
• 2 试验材料
• 2.1 材料
• 2.2 试剂
• 2.3 仪器
• 3 试验方法
• 3.1 大孔吸附树脂的预处理
• 3.2 中药复方多糖的制备
• 3.3 静态吸附试验及解吸试验
• 3.4 动态吸附试验及解吸试验
• 4 结果与分析
• 4.1 静态吸附及解吸试验结果
• 4.2 动态吸附与解吸性能试验结果
• 5 讨论与小结
• 第三章 AB-8大孔吸附树脂对中药复方多糖吸附性能的研究
• 1 引言
• 2 试验材料
• 2.1 原料
• 2.2 试剂
• 2.3 仪器
• 3 试验方法
• 3.1 单因素吸附试验
• 3.2 动态吸附正交试验
• 3.3 验证试验
• 4 结果与分析
• 4.1 单因素试验对大孔吸附树脂的影响
• 4.2 正交试验的结果与分析
• 4.3 验证试验
• 5 讨论与小结
• 第四章 AB-8大孔吸附树脂对中药复方多糖解吸性能的研究
• 1 引言
• 2 试验材料
• 2.1 原料
• 2.2 试剂
• 2.3 仪器
• 3 试验方法
• 3.1 单因素解吸试验
• 3.2 动态解吸正交试验
• 3.3 验证试验
• 3.4 不同组分多糖纯化试验
• 4 结果与分析
• 4.1 大孔树脂的解吸效果
• 4.2 正交试验的结果与分析
• 4.3 验证试验
• 4.4 纯化试验结果
• 5 讨论与小结
• 第五章 不同组分、不同纯度中药复方多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖影响
• 1 引言
• 2 试验材料
• 2.1 试验动物与饲料
• 2.2 试剂
• 3 试验方法
• 3.1 试验药物的配制
• 3.2 小鼠脾淋巴细胞增殖的测定
• 4 数据分析
• 5 结果与分析
• 6 讨论与小结
• 第六章 不同组分、不同纯度中药复方多糖对小鼠免疫活性的研究
• 1 引言
• 2 试验材料
• 2.1 试验动物
• 2.2 药品与试剂
• 2.3 仪器
• 3 试验方法
• 3.1 试验药物的配制
• 3.2 免疫学检测项目及方法
• 4 数据分析
• 5 结果与分析
• 5.1 复方多糖对小鼠红细胞数、白细胞数及白细胞分类数的影响
• 5.2 复方多糖对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
• 5.3 复方多糖对小鼠EA花环形成率的影响
• 5.4 复方多糖对小鼠T淋巴细胞酯酶染色率的影响
• 5.5 复方多糖对小鼠脏器指数的影响
• 6 讨论与小结
• 全文结论
• 参考文献
• 附录
• 附录1
• 附录2
• 附录3
• 致谢
• 作者简介
• 导师评阅表