在体单向肠灌流与Caco-2细胞模型研究黄连解毒汤主要指标成分及其在复方配伍环境中的肠吸收机理

论文摘要

本论文选择经典方——黄连解毒汤作为对象,主要指标成分（栀子苷、小檗碱、黄芩苷）作为指标,研究中药复方多组分肠吸收机理。研究目的：系统考察黄连解毒汤主要指标成分（栀子苷、小檗碱、黄芩苷）肠吸收特点,揭示其组方原理和配伍规律；研究复方模拟体系和复方体系对其主要指标成分肠吸收环节的影响,以确定其生物药剂学性质,阐明药物相互作用；结合复方主要指标成分理化性质、药物动力学特点,探讨理化性质、药动学和肠吸收情况的相关性及复方配伍增效机制。研究内容：1)研究黄连解毒汤主要指标成分理化性质。2)研究黄连解毒汤主要指标成分肠吸收特点及影响吸收的因素（浓度、转运蛋白、吸收促进剂等）。3)研究黄连解毒汤主要指标成分肠吸收的相互作用。4)研究黄连解毒汤模拟体系和复方体系对其主要指标成分肠吸收情况的影响。5)探讨理化性质、渗透系数与药物动力学参数之间的相关性。研究方法：论文根据黄连解毒汤优选工艺,制备其浸膏粉,采用高效液相色谱法测定其主要指标成分（栀子苷、小檗碱和黄芩苷）含量,根据上述三种成分比例,制备黄连解毒汤模拟体系,先初步研究三种单体成分理化性质,再采用大鼠在体单向肠灌流和Caco-2细胞模型考察各单体、黄连解毒汤模拟体系及复方中主要指标成分肠吸收情况,结合相关药动学特点,探讨单体与复方环境下给药的差异。研究结果：表观溶解度、表观油水分配系数研究表明,栀子苷理化性质较稳定,溶解性一般,渗透性较差,papp为0.094（1gPapp=-1.03）,中性条件下较稳定；小檗碱溶解性和渗透性均较差,Papp为0.874（1gPapp=-0.06）,碱性条件下表观溶解度和Papp增大,因此增加小檗碱吸收环境的pH值可能会提高其口服生物利用度；黄芩苷（弱酸性）类似于栀子苷,Papp为0.48（1gPapp=-0.32）,碱性条件下表观溶解度较高,但Papp较低。大鼠在体单向肠灌流模型研究表明：栀子苷在十二指肠吸收较好,具有广泛的吸收窗,主要为被动扩散,可能还包括主动转运或易化扩散,可能不受P-gp、Na+依赖型葡萄糖转运载体（SGLT1）、 MRP2影响,但可能会受EDTA影响。小檗碱在结肠吸收较好,以被动扩散为主,可能不受MRP2和EDTA影响,但可能受P-gp和SGLT1影响。黄芩苷在各肠段吸收较差,无特定吸收部位,主要为被动扩散,可能不受Na+依赖型葡萄糖转运载体（SGLT1）影响,但可能是MRP2的底物。一定浓度的常用吸收促进剂（0.5%十二烷基硫酸钠和吐温80）均能不同程度的促进上述三种成分在小肠的吸收。小檗碱、黄芩苷会影响栀子苷的肠吸收,较栀子苷单体而言,在一定配比下（小檗碱和栀子苷配比约2：1,黄芩苷和栀子苷配比约1.5：1）,能促进其吸收。Caco-2细胞模型研究表明,栀子苷主要为被动扩散,可能还包括细胞旁路转运,但可能不受外排转运蛋白P-gp的调控；小檗碱主要为被动扩散,可能不受EDTA影响,但可能受P-gp影响。两种模型研究均表明,较相同浓度单体而言,黄连解毒汤模拟体系（主要指标成分单体混合物：小檗碱+黄芩苷+栀子苷,下简称：单体混合物）和复方中主要指标成分吸收均显著增加,推测可能是由于上述三种成分与复方中其它成分或伴生物质发生协同作用,从而促进吸收。结论：本实验采用两种生物药剂学模型主要考察中药复方主要指标成分及其在复方背景下的肠吸收特性,结合主要指标成分理化性质和单体、复方环境下药动学特点,探讨药物理化性质、肠吸收和药动学特点的相关性,为阐明中药复方复杂体系配伍规律奠定理论基础,以进一步为其复方及含有该复方主要成分相关制剂设计提供借鉴。实验结论表明,两种模型定性相关性较好,且Caco-2细胞模型重复性较好,可靠性较高；大鼠在体单向肠灌流模型能保持机体原有生理结构,可较好地用于筛选药物吸收部位,设计中药制剂新剂型。

论文目录

• 目录
• 摘要
• Abstract
• 绪论
• 第一章 文献综述
• 第一节 黄连解毒汤主要指标成分研究进展
• 1 黄连解毒汤各药材简介
• 2 黄连解毒汤化学成分和有效部位研究
• 3 黄连解毒汤主要指标成分药效学研究
• 4 黄连解毒汤的临床应用
• 参考文献
• 第二节 中药有效成分肠吸收研究进展
• 1 中药有效成分肠吸收研究概述
• 2 中药肠吸收研究现状
• 3 中药有效成分肠吸收研究方案
• 4 本论文的基本思路
• 参考文献
• 第二章 黄连解毒汤主要指标成分表观溶解度、表观油水分配系数研究
• 1 仪器与试药
• 1.1 仪器
• 1.2 试剂与药品
• 2 方法
• 2.1 黄连解毒汤土要指标成分含量测定
• 2.2 试液准备
• 2.3 表观溶解度测定
• 2.4 表观油水分配系数测定
• 3 结果
• 3.1 表观溶解度试验结果
• 3.2 表观油水分配系数试验结果
• 4 讨论
• 参考文献
• 第三章 大鼠在体单向肠灌流模型研究黄连解毒汤主要指标成分吸收机理
• 第一节 大鼠在体单向肠灌流模型研究栀子苷、小檗碱、黄芩苷单体肠吸收机理
• 1 仪器、试药及动物
• 2 实验方法
• 3 小结
• 第二节 大鼠在体单向肠灌流模型研究复方配伍环境中主要指标成分肠吸收
• 1 黄连解毒汤主要指标成分含量比例
• 2 试液配制
• 3 黄连解毒汤模拟体系中主要指标成分的肠吸收研究
• 4 黄连解毒汤中主要指标成分的肠吸收研究
• 5 小结
• 第三节 大鼠在体单向肠灌流模型研究黄连解毒汤主要指标成分相互作用
• 1 仪器、试药及动物
• 2 实验方法和结果
• 3 讨论
• 第四节 常用吸收促进剂对黄连解毒汤肠吸收的影响
• 1 仪器、试药及动物
• 2 实验方法和结果
• 3 讨论
• 第五节 本章小结
• 1 大鼠在体单向肠灌流模型建立
• 2 黄连解毒汤主要指标成分肠吸收机理探讨
• 参考文献
• 第四章 Caco-2细胞模型研究黄连解毒汤主要指标成分肠吸收机理
• 第一节 Caco-2细胞模型建立
• 1 试药与仪器
• 2 方法
• 第二节 MTT法测药物细胞毒性
• 1 试药与仪器
• 2 实验方法和结果
• 第三节 Caco-2细胞模型研究药物单体转运机理
• 1 试剂、仪器与细胞
• 2 实验方法与结果
• 3 讨论
• 第四节 Caco-2细胞模型研究复方配伍环境中主要指标成分转运机理
• 1 黄连解毒汤中栀子苷与小檗碱含量比例
• 2 黄连解毒汤模拟体系中主要指标成分的肠转运研究
• 3 黄连解毒汤中主要指标成分的肠转运研究
• 4 讨论
• 第五节 本章小结
• 1 Caco-2细胞模型建立
• 2 黄连解毒汤主要指标成分转运机理
• 参考文献
• 第五章 两种模型实验结果及理化性质、渗透系数与药物动力学特性的相关性
• 第一节 Caco-2细胞模型和大鼠在体单向肠灌流模型比较
• 第二节 理化性质、渗透系数与药物动力学特性的相关性探讨
• 参考文献
• 第六章 结论与展望
• 第一节 本课题目的和意义
• 第二节 结论
• 第三节 展望
• 第四节 论文创新点
• 攻读硕士学位期间取得的学术成果
• 致谢