论文摘要
目的调查幽门螺杆菌（H.pylori）微孔蛋白基因（hopw，hopx）及前炎症蛋白基因（opiA）在中国镇江地区汉族人群中的分布情况，并分析这几种基因与慢性胃炎、十二指肠溃疡、胃溃疡和胃癌的关系。比较H.pylori标准菌株NCTC11637的微孔蛋白基因与其它标准菌株（43504、26695、J99）的同源性；克隆鉴定hopw基因及其原核表达产物的免疫性，为H.pylori疫苗的筛选提供实验依据。方法常规培养H.pylori标准菌株NCTC11637及67株临床分离株，快速尿素酶试验和氧化酶试验鉴定。根据GenBank公布的H.pylori ATCC43504的基因序列设计hopx、hopw及opiA引物，PCR法扩增目的基因，统计学方法分析这三种基因在不同菌株中的分布情况。克隆并鉴定标准菌株NCTC11637的hopx、hopw基因，构建hopx、hopw重组质粒，测定其基因序列，并与GenBank公布的国际标准菌株（43504、26695、J99）进行同源性比较；用IPTG诱导、SDS-PAGE鉴定重组HopW蛋白表达，Western blot测定重组HopW蛋白的免疫活性。结果①在67株H.pylori临床菌株中，hopw、hopx及opiA基因表达的阳性率分别为95.5％、95.2％、39.9％；不同疾病来源的临床菌株中hopw、hopx基因表达的阳性率无显著性差异（P＞0.05）；opiA基因在来源于消化性溃疡菌株中的分布中高于其它对照组，具有显著性差异（P＜0.05）。hopw、hopx在这几种疾病中的分布显著高于opiA基因（P＜0.05）。②通过PCR法扩增，分别获得大小为987bp的hopw、1284bp的hopx、900bp的opiA基因片断；通过基因序列测定及比对分析，hopw、hopx和opiA的核苷酸序列与国际标准菌株43504、26695及J99的同源性为94％～96％，推测的氨基酸序列同源性为96％～99％，并在GenBank登录了hopw、hopx基因，登录号为EF59968、EF208122。③获得了hopw-PET32a、hopx-PQE30原核表达重组质粒及原核表达的融合蛋白hopw-PET32a，并用Ni+-NTA柱分离纯化了HopW蛋白，Western-blot鉴定了该蛋白具有较好的反应性和特异性。结论①hopx，、hopw基因分布与所致临床疾病无关；opiA基因在来源于消化性溃疡的临床菌株中的阳性率显著高于其它疾病来源菌株。②hopw、hopx基因分布有相关性，但与opiA基因分布无关。③成功克隆并构建了NCTC11637的hopx、hopw基因的重组质粒；与GenBank公布的基因序列高度同源。④成功在大肠埃希菌中表达了HopW蛋白，为研究H.pylori外膜蛋白功能及疫苗制备奠定了基础。