105例头颈鳞癌和59例头颈慢性炎症患者中高危型人乳头状瘤病毒感染率初步调查及基因变异分析

论文摘要

目的：从全球来看,头颈部恶性肿瘤发病率位于恶性肿瘤第六位,每年新增发病率是645,000例,而其中近九成是头颈鳞状细胞癌。全球约有26%的头颈部鳞癌检测出高危人乳头状瘤病（HPV）毒致癌基因组DNA。近年来研究发现HPV阳性的头颈鳞状细胞癌患者癌细胞的基因表达模式完全不同于HPV阴性患者的基因表达模式,且前者生存率优于后者。调查四川省肿瘤医院头颈鳞癌HPV的感染情况,并与国内外资料对比,分析HPV在头颈鳞癌中基因组型,并为四川地区HPV与头颈鳞癌相关研究提供一定的基础资料。方法：2009年5月至2010年10月四川省肿瘤医院头颈鳞癌患者的病灶组织标本和口咽拭子标本（共105例）、头颈鳞癌患者的病灶阴性切缘组织标本（共32例）、头颈慢性炎症（咽炎、口腔炎、扁桃体炎、舌炎）患者口咽拭子标本59例。其中检查出HPV阳性的女性患者（1例口咽癌、2例咽炎）行宫颈拭子标本3例。先提取所有标本基因组,再用β-globin球蛋白验证提取的基因组。并应用普适引物MY09/MY11（针对HPVL1基因）,E6/E7各型（16,18,33,45,52,58和59型）特异引物进行PCR和巢式PCR扩增,并对各型E2特异性引物进行扩增。PCR产物经纯化后进行双向测序,以获得序列信息。结果：105例头颈鳞癌标本中HPV阳性率为11.4%（12/105）,其中30例喉癌中有4例阳性,39例口腔癌中有4例阳性,23例口咽癌中有3例阳性,2例鼻咽癌中有1例阳性,感染型别HPV16,HPV52；其中男性患者阳性率11.8%（7/57）,女性患者阳性率10.87%（5/46）,两者之间比较,P<0.05；在12例病毒癌基因中发现11例L1或E2处断裂,说明有11例病毒癌基因整合进宿主基因组。59例头颈慢性炎患者3例HPV阳性,感染率为5.08%,其中一例口咽拭子患者HPV感染型别为HPV16,其基因第5635位（即L1基因第75位）发生突变,并形成终止子“TAG”。32例头颈鳞癌阴性切缘组织2例HPV阳性,感染率为6.25%,感染型别为HPV16。运用spss13.0统计学软件分别对头颈鳞癌组与头颈鳞癌切缘阴性组、头颈鳞癌组与头颈部慢性炎症行卡方检验,分析结果均示P>0.05（P=0.717和P=1.829）,无统计学意义。3例口咽拭子检查出HPV阳性的女性患者宫颈拭子均未检测出HPV感染。结论：初步调查显示,与国内、国外相比四川地区头颈鳞癌的HPV感染率偏低（感染型别以HPV16为主）,头颈鳞癌HPV感染率与型别在不同的国家以及同一国家不同地区之间可能存在着人种、地理环境和性行为方式上的差异；12例病毒癌基因中有11例整合,说明头颈鳞癌中HPV整合率高；一例对照组慢性咽炎患者HPV L1发生突变后,并形成终止子,使病毒外壳无法合成而终止增殖,提示人体中可能存在一种针对HPV的特殊抗病毒因子。常规对头颈肿瘤患者行HPV检测（包括头颈肿瘤患者病灶阴性组织切缘）有临床意义。对普通人群中的女性同时行宫颈拭子及口咽拭子检测有一定临床研究价值。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 1. 研究内容背景知识
• 1. HPV概述
• 1.1.1 HPV的基本结构
• 1.1.2 HPV分类
• 1.1.3 HPV基因组结构特点及功能
• 1.2 HPV致癌机理
• 1.3 HPV与头颈鳞癌
• 2. 材料与方法
• 2.1 基因组DNA的提取
• 2.1.1 实验对象
• 2.1.2 实验仪器及试剂
• 2.1.3 实验方法
• 2.2 PCR反应
• 2.2.1 主要仪器及试剂
• 2.2.2 PCR反应方法
• 2.3 测序
• 2.4 统计方法
• 3. 结果
• 3.1 数据统计
• 3.2 基因测序结果
• 3.3 临床相关的调查
• 4. 讨论
• 4.1 阳性率情况
• 4.2 基因分析
• 4.3 临床相关调查
• 总结
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 在读期间发表文章