耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶及整合子研究

论文摘要

目的调查我院临床分离的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌对各类抗生素的耐药性,了解碳青霉烯酶及整合子分布情况,分析耐药菌株医院内感染的分子流行病学特征,指导临床有效控制耐药菌株在医院内的传播。方法收集2008年1月至2010年3月天津医科大学总医院临床分离的非重复耐亚胺培南鲍曼不动杆菌103株,应用Vitek-2 compact系统进行药敏试验,采用改良Hodge试验、改良三维试验、EDTA协同试验和2-巯基丙酸协同试验初筛碳青霉烯酶；多重PCR同时检测OXA类碳青霉烯酶基因（blaOXA-23-like, blaOXA-24-like, blaOXA-51-like, blaOXA-58-like）、金属酶基因（IMP-1, VIM-2）、I类和II类整合酶基因（intI1, intI2）;单一PCR检测OXA类基因上游插入序列ISAbal,对整合酶基因阳性菌株再进行整合子可变区的扩增,并测序分析整合子可变区携带的耐药基因盒；应用随机扩增多态性DNA （RAPD）技术对所有菌株进行分子流行病学研究,确定耐药菌株间的亲缘关系。结果103株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌对所测试的15种抗生素耐药现象十分严重,所有菌株同时对美罗培南耐药,菌株对头孢哌酮/舒巴坦的敏感率最高（35.9%）,其次为阿米卡星（29.1%）,对其余抗菌药物的敏感率均低于21.0%；改良Hodge试验碳青霉烯酶阳性75株（72.8%）,改良三维试验检出产酶菌株80株（77.7%）,美罗培南与EDTA协同共检出金属酶表型阳性菌株47株（45.6%）,头孢他啶与EDTA协同发现金属酶表型阳性46株（44.7%）,所有菌株使用头孢他啶与2-巯基丙酸协同未检测到金属酶阳性菌株；多重PCR结果表明,所有菌株均携带blaOXA-51-like基因,阳性检出率100%,blaOXA-23-like阳性89株,阳性检出率86.4%,本研究还发现2株菌携带blaOXA-24-like基因,检出率1.9%,Ⅰ类整合酶基因（intI1）阳性92株,阳性检出率89.3%；两种及两种以上耐药基因携带情况为：blaOXA-51-like+blaOXA-23-like+intI1基因84株,blaOXA-51-like+blaOXA-23-like阳性5株,blaOXA-51-like+intl1阳性8株,blaOXA-51-like+blaOXA-24-like日性2株；4株菌仅blaOXA-51-like阳性,blaOXA-58-like、金属酶基因（IMP-1,VIM-2）及II类整合酶基因（intI2）均阴性；经测序及比对证实,blaOXA-23-like确定为blaOXA-23’ blaOXA-24-like确定为blaOXA-72’ blaOXA-51-like确定为blaOXA-66基因；87株OXA-23-like基因上游检测到ISAbal, OXA-51-like基因上游未检测到ISAbal。92株I类整合酶阳性菌株中有89株（96.7%）扩增出可变区,4株未检出可变区。共发现2种整合子可变区：2300 bp 81株,3000 bp 8株。经测序比对证实,2300 bp可变区携带耐药基因盒aacA4-catB8-aadA1,3000bp携带基因盒aacC1-orfX-orfX-orfX’-aadA1a;RAPD将103株鲍曼不动杆菌分成7个基因型,其中：A型共45株,为主要克隆；B型23株,C型16株,D型10株,E型7株,F型（产OXA-72型碳青霉烯酶）1株,G型1株（产OXA-72型碳青霉烯酶）。结论本组耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌对多种抗菌药物耐药现象严重,改良Hodge试验与改良三维试验可联合用于筛查鲍曼不动杆菌的碳青霉烯酶,但仍需要经PCR确证耐药基因的存在与否。鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类耐药主要与产OXA-23型碳青霉烯酶相关,ISAbal与OXA-23基因有密切的联系并可能参与了OXA-23基因表达的调控；I类整合子主要介导对氨基糖苷类及氯霉素耐药；RAPD结果提示耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌存在医院内克隆株传播。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略语
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 一、鲍曼不动杆菌的耐药状况及碳青霉烯酶表型检测
• 1.1 材料和方法
• 1.1.1 材料
• 1.1.2 方法
• 1.2 结果
• 1.2.1 药敏试验结果
• 1.2.2 碳青霉烯酶表型检测结果
• 1.3 讨论
• 1.3.1 药敏结果分析
• 1.3.2 碳青霉烯酶表型检测结果分析
• 1.4 小结
• 二、鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型及整合子检测
• 2.1 材料和方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 方法
• 2.2 结果
• 2.2.1 碳青霉烯酶及整合酶基因检测结果
• 2.2.2 ISAbal检测结果
• 2.2.3 改良Hodge试验、改良三维试验与OXA类酶检测结果
• 2.2.4 整合子耐药基因盒检测结果
• 2.2.5 PCR产物测序结果
• 2.3 讨论
• 2.3.1 OXA类碳青霉烯酶检测结果分析
• 2.3.2 金属酶检测结果分析
• 2.3.3 整合子检测结果分析
• 2.4 小结
• 三、耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌分子流行病学研究
• 3.1 材料和方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 方法
• 3.2 结果
• 3.2.1 RAPD基因分型结果
• 3.2.2 菌株来源分布
• 3.3 讨论
• 3.3.1 鲍曼不动杆菌感染的危险因素
• 3.3.2 RAPD分型结果分析
• 3.4 小结
• 结论
• 参考文献
• 发表论文情况说明
• 综述
• 综述参考文献
• 致谢