转座子与整合子遗传标记在耐多药产ESBLs大肠埃希菌中相关性探讨

论文摘要

目的：了解本地产超广谱β—内酰胺酶（extended spectrum beta-lactamases, ESBLs）大肠埃希菌（Escherichia coli）的耐药情况,探讨转座子与整合子遗传标志在耐多药产ESBLs大肠埃希菌中的作用。方法：1.初步筛选试验（Screening test）:选用头孢噻肟、头孢他啶、氨曲南、头孢曲松药敏纸片对71株大肠埃希菌进行产ESBLs筛选试验,凡头孢他啶的抑菌环直径≤22 mm,头孢曲松≤25 mm,氨曲南或头孢噻肟≤27 mm,则提示为可疑产ESBLs菌株。2.纸片确认试验（Confirmatory tests）:将初筛可疑产ESBLs菌株同时用头孢他啶和头孢他啶加克拉维酸、头孢噻肟和头孢噻肟加克拉维酸作药敏试验,对任何一组药物,加克拉维酸前后抑菌环直径相差≥5mm可确认为产ESBLs菌株。3.药敏试验：纸片扩散法（Kerby-Bauer法,K-B法）,采用NCCLS推荐的方法测定71株大肠埃希菌对三类6种常用抗菌药物—链霉素（S）、阿米卡星（A）、环丙沙星（CIP）、左氧氟沙星（LEV）、头孢噻肟（CTX）、头孢西丁（FOX）的耐药性。采用大肠埃希菌标准菌株ATCC 25922进行质控。4.PCR技术：采用Biospin细菌基因组DNA试剂盒提取大肠埃希菌DNA。根据qacE△1-sul1基因（Ⅰ类整合子遗传标记）、merA（为转座子Tn21和Tn501共同的遗传标记）、tnpA（为转座子Tn1、Tn2、Tn3和Tn1000共同的遗传标志）、tnpU（为转座子Tn1548遗传标）设计四对引物,以提取的大肠埃希菌DNA为反应模板进行PCR扩增。将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳、紫外线检测仪观察结果及送检做基因测序。结果：1.产ESBLs菌株的检测结果：临床分离的71株大肠埃希菌表型筛选试验初步筛出可疑产ESBLs 55株（77.46%）,进一步确认试验共检出产ESBLs35株（49.30%）。2.临床分离株对6种抗生素耐药分布：（1）耐S 41株、耐A 6株、耐LEV 45株、耐CIP 51株、耐CTX 44株、耐FOX 9株；（2）耐药模式分布：多耐模式45株（63.38%）、双耐8株（11.27%）、单耐11株（15.49%）、全敏感菌株7株（9.86%）。3.转座子的检出：PCR法检出遗传标记merA阳性菌共15株（21.13%）,而转座子tnpA和tnpU均未检出。不同耐药模式中转座子遗传标记merA检出率的比较有统计学差异（P<0.05）。产ESBLs酶菌株中不同耐药模式中转座子遗传标记merA检出率的比较有统计学差异（P<0.05）；非产ESBLs酶菌株中不同耐药模式中转座子遗传标记merA检出率的比较无统计学差异（P>0.05）。4.整合子遗传标记（qacE△1-sul1）的检出：PCR法共检出55株（77.46%）,其中多耐模式菌株检出率最高为88.89%（40株）,其次为双耐模式75%（6株）,单耐模式中检出率最低为22.22%（2株）,不同耐药模式中整合子遗传标记检出率有统计学差异（P<0.05）。产ESBLs酶菌株中不同耐药模式的整合子遗传标记检出率有统计学差异（P<0.05）；非产ESBLs酶菌株不同耐药模式中整合子遗传标记检出率无统计学差异（P>0.05）。5.转座子阳性株中整合子检出情况：共检出10株（66.67%）,其中多耐模式中两者重叠率最高为80%（8株）、双耐20%（2株）。6.转座子遗传标记merA在产ESBLs酶且整合子阳性菌株中的检出：共检出6株,其中多耐模式4株,双耐2株,单耐未检出。不同耐药模式中检出率有统计学差异（P<0.05）。结论：1.本地区大肠埃希菌耐药情况严重,产ESBLs酶菌株常见,并以多耐模式菌株为主；2.转座子、整合子的分布以耐多药模式菌株为主；3.同时携带整合子和转座子基因的菌株多表现为耐药,尤其在耐多药模式中更为明显；4.产ESBLs酶且同时携带转座子、整合子基因的菌株主要分布在耐多药模式菌株中,该三者在多重耐药机制中可能存在一定的联系。

论文目录

• 摘要
• Abstract
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• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
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• 致谢
• 综述
• 参考文献