柿子多糖的提取、分离、结构分析及体外抗氧化作用研究

论文摘要

柿子（Diospyros Kaki L.f）属柿树科,为药食同源植物。柿子含有多种生物活性成分,有助于降低血压,软化血管,增加冠状动脉流量,并且能活血消炎,改善心血管功能,还可以促进血液中乙醇的氧化,帮助机体对酒精的排泄,减少酒精对机体的伤害,柿子中的有机酸等有助于胃肠消化,增进食欲,同时有涩肠止血的功效,因此具有重要的研究与开发价值。本文对柿子多糖的提取、分离纯化、结构分析、体外抗氧化活性等进行了系统研究,获得如下结论：（1）采用单因素试验和正交实验对柿子多糖的热水浸提工艺和超声波辅助提取工艺进行了研究,得出了柿子多糖热水浸提的最佳提取工艺条件为：料液比1:10,浸提温度90℃,浸提时间4h,柿子多糖的得率为7.62%。柿子多糖超声波辅助提取的最佳提取工艺条件为：料液比1:25,超声处理35min后,在80℃下浸提4h,柿子多糖的得率为14.17%。（2）柿子多糖乙醇沉淀的最佳工艺条件为：柿子多糖提取液:95%乙醇（v/v）为1:4,沉淀时间12h。（3）以多糖保留率和蛋白质脱除率为考察指标,比较了Sevag法、TCA-Sevag结合法和酶-Sevag结合法对柿子多糖蛋白的脱除效果,确定了柿子多糖蛋白的最好脱除方法是酶-Sevag结合法。其蛋白质的脱除工艺条件为：木瓜蛋白酶（500u/mL）在60℃下酶解3h后,采用Sevag法脱除蛋白质,蛋白质的脱除率为61.2%,多糖的保留率为76.2%。（4）比较了活性炭和过氧化氢对柿子多糖色素的脱除效果,确定了柿子多糖色素脱除的最佳方法及其工艺条件为：30%双氧水:柿子多糖水溶液（v/v）=1:1,脱色pH=10.0,脱色温度60℃,脱色时间1h,柿子多糖的保留率为94%。（5）采用季铵盐沉淀法对柿子粗多糖进行分离,得到了水溶性的WPP1和10%氯化钠盐溶性的WPP2两个柿子多糖组分。WPP1和WPP2经Sephadex G-100柱层析、比旋光度法、紫外光谱扫描及高效液相色谱法鉴定均为均一多糖,不含蛋白质、核酸和色素。WPP1是含有a糖苷键的化合物,由鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖和D-半乳糖四种单糖组成,四种单糖的摩尔比为0.8831:0.6862:0.7022:1,分子量为2.05×105Da。WPP2由阿拉伯糖和D-半乳糖两种单糖组成,其摩尔比为0.8466:1,分子量为2.63×105Da。（6）研究了柿子多糖的体外抗氧化活性。研究结果表明,柿子粗多糖WPP及其分离组分WPP1和WPP2对羟自由基、DPPH自由基和超氧阴离子具有很好的清除效果,且清除效果与多糖的浓度成正比,在同浓度下,WPP的清除能力要显著高于WPP1和WPP2。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 符号与缩略语
• 第1章 引言
• 1 多糖的概述
• 2 多糖的提取
• 2.1 溶剂提取法
• 2.2 超声强化提取法
• 2.3 微波辅助提取法
• 2.4 酶法
• 2.5 超滤法
• 2.6 超临界流体萃取法
• 3 多糖的分离纯化及分子量的测定
• 4 多糖的结构分析
• 5 多糖的生物活性
• 5.1 免疫调节作用
• 5.2 抗肿瘤作用
• 5.3 抗病毒作用
• 5.4 抗衰老作用
• 6 多糖的应用发展前景
• 7 柿子主要营养成分及药用价值
• 8 立题意义及主要研究内容
• 第2章 柿子多糖的提取
• 1 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 主要试剂
• 1.3 仪器
• 1.4 实验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 苯酚硫酸法测定多糖含量的标准曲线
• 2.2 柿子多糖的热水浸提工艺研究
• 2.3 柿子多糖超声辅助提取工艺的研究
• 2.4 柿子多糖乙醇沉淀工艺研究
• 2.5 柿子粗多糖的鉴定与分析
• 2.6 柿子多糖中蛋白质含量的测定
• 2.7 柿子多糖蛋白质的脱除方法研究
• 2.8 柿子多糖色素脱除方法的研究
• 3 小结
• 第3章 柿子多糖的分离纯化与结构分析
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要仪器
• 1.4 实验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 柿子多糖的分离纯化
• 2.2 柿子多糖的纯度鉴定
• 2.3 柿子多糖分子量的测定结果
• 2.4 柿子多糖的单糖组成的测定结果
• 2.5 柿子多糖的光谱分析
• 2.6 柿子多糖的环境扫描电镜（SEM）观察结果
• 3 小结
• 第4章 柿子多糖的体外抗氧化活性研究
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料与试剂
• 1.2 主要仪器
• 1.3 实验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 柿子多糖对羟自由基的清除作用
• 2.2 柿子多糖对1,1-二苯基-2-苦苯肼自由基（DPPH·）的清除作用
• 2.3 柿子多糖对超氧阴离子的清除作用
• 3 小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间研究成果