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白芍总苷对糖尿病大鼠肾组织IL-1与TNF-α表达影响的试验研究

2020-12-02阅读(751)

白芍总苷对糖尿病大鼠肾组织IL-1与TNF-α表达影响的试验研究

论文摘要

背景与目的糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）已成为终未期肾病（End stagerenal disease,ESRD）的主要病因之一,其发生与发展的内在机制尚未完全阐明。现在越来越多的证据显示慢性低度炎症和自然免疫系统的激活与糖尿病肾病的发病密切相关,促炎症因子,特别是肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）和白介素-1（Interleukin-1,IL-1）,在糖尿病肾病的发生发展中起着极其重要的作用,而体内外研究均提示抗炎治疗对延缓糖尿病肾病的进展有效。白芍总苷（Totalglucosides of paeony,TGP）是我国传统中药白芍（Paeonia lactiflora Pall）根中提取的有效成分,其药理作用主要有抗炎、抗氧化与免疫调节活性。本研究观察了TGP对实验性糖尿病模型肾内促炎症因子IL-1与TNF-α表达的影响,旨在进一步探讨TGP对糖尿病肾脏保护作用机制。方法应用链脲佐菌素诱导大鼠糖尿病模型,随机分:正常组、模型组、TGP给药组。TGP按50,100,200 mg.kg-1不同剂量每日灌胃给药,正常组和模型组每日给予等量溶媒,共8 wk。血糖、肝功能、肾功能与血脂由全自动生化分析仪检测,尿蛋白检测采用酶联免疫法（Enzymeimmunoassay,EIA）,PAS染色对肾组织作病理形态学检查同时采用彩色病理图像分析系统测定肾小球平均容积（glomerular volume,VG）、肾小管损伤指数（Indices for tubulointerstitial injury,TII）,肾组织IL-1、TNF-α蛋白表达采用Western印迹方法检测,肾组织转化生长因子β1（Transforming growth factorβ1,TGF-β1）表达采用免疫组化方法检测。结果1、各组大鼠一般指标变化与对照组相比,模型组大鼠表现为血糖升高、体重下降、相对肾重（肾重/体重）增加,TGP(50,100,200mg.kg-1)给药8wk没有防止模型组大鼠血糖升高与体重下降。TGP(50,100,200mg.kg-1)给药组大鼠相对肾重与模型组相比有所下降,但差异无统计学意义。模型组大鼠尿白蛋白排泄率（Urinary albumin excretion rate,UAER）明显高于对照组,TGP 50,100,200 mg.kg-1给药8 wk大鼠UAER水平明显低于模型组。模型组大鼠Ccr明显低于对照组,TGP(50,100,200 mg.kg-1)给药组Ccr水平与模型组相比无明显差异。模型组大鼠血TC、TG水平明显高于对照组,TGP(50,100,200 mg.kg-1)给药组血TC、TG水平与模型组相比无明显差异。另外,模型组、各给药组与对照组相比,血谷丙转氨酶、谷草转氨酶无明显变化,提示TGP对肝功能指标无明显影响。2、各组大鼠肾组织病理形态学变化模型组大鼠VG与TII明显高于对照组,提示本模型大鼠已出现肾小球肥大与肾小管-间质损害;TGP 50 mg.kg-1给药组大鼠VG明显低于模型组,TII较模型组有所下降,但差异未达统计学意义,TGP100,200 mg.kg-1给药组VG与TII均明显低于模型组（P＜0.05,P＜0.01）。3、各组大鼠肾组织IL-1与TNF-α蛋白表达变化Western印迹显示模型组肾组织IL-1,TNF-α蛋白表达明显高于对照组,TGP给药(50,100与200 mg.kg-1)8wk呈剂量依赖性降低它们的表达。4、各组大鼠肾组织TGF-β1蛋白表达变化免疫组化显示对照组大鼠肾小球与肾小管-间质有微弱TGF-β1蛋白表达,模型组肾小球与肾小管-间质TGF-β1蛋白表达明显高于对照组（p＜0.01）,TGP 50 mg.kg-1给药组肾小球与肾小管-间质TGF-β1蛋白表达低于模型组,但差异无统计学意义,TGP 100,200mg.kg-1给药组肾小球与肾小管-间质TGF-β1蛋白表达明显低于模型组（p＜0.05,0.01）。结论TGP可明显改善糖尿病大鼠早期肾损害,其机制可能部分与抑制糖尿病大鼠肾组织过度表达的前炎症介质IL-1与TNF-α蛋白有关。

论文目录

  • 英文缩略词
  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 1 前言
  • 2 材料与方法
  • 2.1 材料
  • 2.1.1 动物
  • 2.1.2 药品
  • 2.1.3 试剂
  • 2.1.4 仪器与设备
  • 2.2 方法
  • 2.2.1 建立大鼠糖尿病模型
  • 2.2.2 动物分组及处理
  • 2.2.3 标本收集
  • 2.2.4 血、尿生化指标测定
  • 2.2.5 尿白蛋白排泄率（UAER）测定
  • 2.2.6 内生肌酐清除率（Ccr）测定
  • 2.2.7 肾脏组织病理形态学分析
  • 2.2.8 肾组织IL-1、TNF-α蛋白表达Western blot测定
  • 2.2.9 肾组织TGFβ1免疫组织化学
  • 2.2.10 统计学处理
  • 3 结果
  • 3.1 各组大鼠一般指标变化
  • 3.2 各组大鼠肾组织病理形态学改变
  • 3.4 各组大鼠肾组织IL-1、TNF-α蛋白表达变化
  • 3.5 各组大鼠肾组织TGFβ1表达变化
  • 4 讨论
  • 4.1 糖尿病肾病发病流行现状与趋势
  • 4.2 糖尿病肾病发病机制
  • 4.3 糖尿病肾病治疗现状
  • 4.4 TGP对糖尿病肾病抑制作用机制
  • 4.4.1 TGP对糖尿病大鼠肾脏保护作用
  • 4.4.2 TGP对糖尿病大鼠肾内促炎症因子TNF-α、IL-1的影响
  • 4.4.3 TGP对糖尿病大鼠肾内TGF-β1表达的影响
  • 5 小结
  • 参考文献
  • 附录
  • 致谢
  • 综述:炎症相关因子在糖尿病肾病中的研究进展

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