降血压和降胆固醇大豆肽的分离纯化

论文摘要

有控制的大豆蛋白酶法水解是制备具有确切生理活性的大豆肽的有效途径。本论文在以水解产物ACE抑制活性、胆固醇胶束溶解抑制活性为指标优化蛋白酶种类、大豆蛋白水解度的基础上,采用大孔吸附树脂、凝胶过滤色谱、离子交换色谱、反相高效液相（RP-HPLC）对得到的混合肽进行分离纯化,并最终采用LC-MS （质谱）对分离得到的单一具有高活性的肽的氨基酸序列进行了鉴定。Alcalase水解得到的具有降胆固醇（DH18%）和降血压（DH14%）作用的大豆分离蛋白水解液通过DA201-C型大孔吸附树脂脱盐,同时采用不同浓度乙醇分级分离,得出在乙醇浓度达到75%时洗脱下来的组分具有最高的降胆固醇和降血压活性,抑制率分别为63.53%和56.52%。这两种组分经Sephadex G-15分离时,0.01 mol/L的HCl溶液作为洗脱液对降胆固醇肽的分离有较好的效果;1 mol/L的醋酸溶液作为洗脱液对降血压肽的分离有较好的效果。测定Sephadex G-15分离后各部分的活性,得出降胆固醇肽组分2对胆固醇胶束溶解度的抑制活性最强,抑制率为73.21%;降血压肽组分5的ACE抑制活性最强,抑制率为69.57%。SP-Sephadex C-25阳离子交换剂对乙醇浓度为75%时从大孔吸附树脂洗脱下来的大豆降血压肽的色谱分离条件如下:SP-Sephadex C-25对降压肽的有效交换量大致是0.004 g/mL IE;当起始缓冲液为1 M醋酸时,SP-Sephadex C-25对大豆降血压肽有最大的吸附效果,其吸附率为61.19%;当缓冲液的NaCl浓度为1 M时,被离子交换剂所吸附的肽能够被完全洗脱下来。经SP-Sephadex C-25分离后ACE抑制活性最高的组分是峰5,为62.75%,峰4和峰6也有较高的抑制活性,分别为61.76%和60.78%,三个峰的ACE抑制活性都较高,无法取舍最佳的活性组分。因此,与Sephadex G-15的分离效果比较,SP-Sephadex C-25在对大豆肽生物活性差别的分离上效果欠佳,实验不予采用。大豆降血压肽经过制备型RP-HPLC分离后主要得到11个组分峰,再经分析型RP-HPLC纯化得到具有最高ACE抑制活性的组分9-Ⅰ,抑制率为98.46%;大豆降胆固醇肽经过制备型RP-HPLC分离后主要得到15个组分峰,其中组分7的降胆固醇活性最高,达到了90.34%。经过LC-MS序列分析,降血压组分9-Ⅰ的相对分子质量为772.4,有三种可能的结构:VISTGAEP、VLSTGAEP和ANSAGTVGP;降胆固醇组分7的相对分子质量为629.4,也有三种可能的结构:WGAPVT、WGAPSL和WGAPSI。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1.1 大豆肽的生理功能
• 1.2 大豆活性肽的研究开发前景
• 1.3 立题背景和意义
• 1.4 本论文研究的主要内容
• 第二章 大孔吸附树脂以及凝胶过滤色谱分离大豆活性肽
• 2.1 前言
• 2.2 实验材料与设备
• 2.3 实验方法
• 2.4 结果与讨论
• 2.5 小结
• 第三章 离子交换色谱分离大豆降血压肽
• 3.1 前言
• 3.2 实验材料与设备
• 3.3 实验方法
• 3.4 结果与讨论
• 3.5 小结
• 第四章 反相高效液相色谱分离大豆活性肽
• 4.1 前言
• 4.2 实验材料与设备
• 4.3 实验方法
• 4.4 结果与讨论
• 4.5 小结
• 主要结论
• 问题与展望
• 致谢
• 参考文献
• 攻读硕士期间发表论文情况