山仔水华微囊藻毒素对小鼠淋巴细胞免疫功能的影响及其机理研究

论文摘要

目的:研究山仔水华微囊藻毒素对小鼠淋巴细胞免疫功能的影响并探讨其可能机制。方法:1.山仔水华微囊藻毒素对小鼠淋巴细胞的免疫抑制作用无菌取脾淋巴细胞,用RPMI1640完全培养基稀释成3.0×106/ml的脾淋巴细胞悬液加入96孔平底培养板中,每孔0.2ml,染毒剂量是0、1、3、5、10μgMC-LR/ml,平行作6孔,观察MC-LR对小鼠T、B淋巴细胞增殖的影响;无菌取小鼠NK细胞,用RPMI1640完全培养基稀释成3.0×106/ml,染毒剂量是0、1、3、5、10μgMC-LR/ml,平行作6孔,观察MC-LR作用24、48和72小时对小鼠NK细胞活性的影响。2.山仔水华微囊藻毒素影响小鼠淋巴细胞免疫功能的部分机理研究无菌取脾淋巴细胞,用RPMI1640完全培养基稀释成3.0×106/ml的脾淋巴细胞悬液,加入48孔平底培养板中,每孔0.2ml,染毒剂量是0、1、3、5、10μgMC-LR/ml,作6个平行孔。染毒24小时,收集上清液用ELISA试剂盒测定小鼠淋巴细胞因子IL-2的含量,提取细胞总RNA, RT-PCR检测IL-2mRNA的表达量;用荧光染色和流式细胞术检测山仔水华微囊藻毒素对小鼠淋巴细胞凋亡的影响。结果:1.山仔水华微囊藻毒素对小鼠淋巴细胞的免疫抑制作用1.1 1,3,5,10μg MC-LR /ml剂量的山仔水华微囊藻毒素依次降低T、B淋巴细胞刺激指数SI,有明显的剂量-效应关系,各组SI与对照组比较,差别有统计学意义（P<0.05）。2.1山仔水华微囊藻毒素作用24小时对小鼠NK细胞活性有不同程度的抑制作用,其中5,10μg MC-LR/ml剂量组NK细胞的活性显著下降,与对照组比较差别有统计学意义（P<0.05）;染毒48和72小时,1,3,5,10μg MC-LR/ml剂量组均可降低小鼠NK细胞的活性,与对照组比较差别有统计学意义（P<0.05）,表现出剂量-时间-效应关系。2.山仔水华微囊藻毒素影响小鼠淋巴细胞免疫功能的部分机理研究2.1山仔水华微囊藻毒素对小鼠淋巴细胞分泌IL-2的影响表现出双相性,即1, 3μg MC-LR/ml剂量的山仔水华微囊藻毒素可以使淋巴细胞因子IL-2的含量和IL-2 mRNA表达量升高,其中1μg MC-LR/ml剂量组与对照组比较差别有统计学意义（P<0.05）,而3μg MC-LR /ml剂量组的升高幅度不明显,与对照组比较差别无统计学意义（P>0.05）;5,10μg MC-LR/ml剂量的山仔水华微囊藻毒素可以使淋巴细胞因子IL-2的含量和IL-2 mRNA表达量降低,与对照组比较差别有统计学意义（P<0.05）。2.2荧光染色发现5、10μg/ml剂量的山仔水华微囊藻毒素使淋巴细胞体积缩小,显示亮黄色荧光的细胞核呈现“新月状”、“条状”甚至“碎片状”等典型的细胞凋亡形态,对照组淋巴细胞的细胞核边界规则整齐,染色质染成黄绿色并分布均匀、无明显的浓染集块现象;其中10μg MC-LR/ml剂量组淋巴细胞凋亡率明显升高,与对照组比较差别有统计学意义（P<0.05）。流式细胞术检测,10μg MC-LR/ml剂量组出现明显的“亚G1峰”,淋巴细胞凋亡率明显升高,与对照组比较差别有统计学意义（P<0.05）。结论:1.山仔水华微囊藻毒素可以明显抑制小鼠脾T、B淋巴细胞的增殖,降低NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性,抑制小鼠淋巴细胞免疫功能,有明显的剂量-时间-效应关系。2.在体外细胞培养条件下,5,10μg MC-LR/ml剂量的山仔水华微囊藻毒素明显抑制小鼠淋巴细胞IL-2mRNA的表达,降低小鼠淋巴细胞因子IL-2的产量,可能是其抑制小鼠淋巴细胞免疫功能的机制之一。3.在体外细胞培养条件下,10μg MC-LR/ml剂量的山仔水华微囊藻毒素使小鼠淋巴细胞凋亡率明显升高,促进淋巴细胞凋亡可能是其降低小鼠淋巴细胞免疫功能的另一机制。4.淋巴细胞因子IL-2对低剂量微囊藻毒素（1μg MC-LR/ml）的暴露更为敏感,可望用于微囊藻毒素免疫毒性的早期预报。

论文目录

• 缩略词英文对照
• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• 第一部分 山仔水华微囊藻毒素对小鼠淋巴细胞的免疫抑制作用
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分 山仔水华微囊藻毒素影响小鼠淋巴细胞免疫功能的部分机理研究
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述